细胞污染简介(整理).pdfVIP

细胞培养中常见的污染情况总结如下:

常见的污染如下：

1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，

培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在

高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续

两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存

在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理

你的培养液应该一两天内很快变混浊．刚开始小虫杆状成串，不怎么动，多了以后就不成串了，移动

迅速，是这样吗？如果是，细菌培养液是被洋葱佰克霍尔德菌污染了。

洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌，因引起洋葱患病而得

名，是医院感染病原菌之一。

洋葱伯克霍尔德菌是一种广泛存在于土壤及水中，与医院感染密切相关的革兰阴性杆菌，尤其为免疫缺陷

及肺囊性纤维化患者易感染细菌之一。它可以在无糖的培养基中生长。在医院环境中常可污染自来水、体

温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、静脉输液管等，造成院内传播，导致多种医院感染，如败血症、心内

膜炎、肺炎、伤口感染、深部脓肿和眼结膜炎等，尤其采用导管植入进行治疗者，更容易引起感染。洋葱

伯克霍尔德菌对多种抗菌药具有天然的耐药性。耐药现象严重，治疗可选择复方磺胺甲懒唑、哌拉西林,

三唑巴坦、哌拉西林和头孢他啶等抗菌药物。

参考文献：洋葱伯克霍尔德菌86株的分布与耐药性尤荣开，等中国抗感染化疗杂志2003年2月

28日第3卷第1期

2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现

絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时

间长之后，细胞的活力状态变差.

用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的

托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，

可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放

置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应

定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－

清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉

素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素

D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，

可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要

注意操作

3、支原体：黑色的，好象多为多形,培养液一般

会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做

支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常

见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法

除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很

明显，只是慢慢死去。

用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于

细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的

使用时用50ug/mlTylosin培养液培养6天或

连续传两代即可清除支原体污染。如果作为

常用的抗生素的话,建议用8ug/ml的浓度。

4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色

的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生

长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一

批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之

后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增

加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。

5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是

它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状

物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染

了，也很难救活了。培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，

细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。

他