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核酸分离纯化与测序PCR技术复习题及答案
一、填空题
1.SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂,它有四个作用:
①溶解膜蛋白及脂肪,从而使细胞膜破裂;
②溶解核膜和核小体,使其解聚,将核酸释放出来;
③对RNas、DNas有一定的抑制作用;
④SDS能够与蛋白质结合形成R-0-S03
一R一蛋白质复合物,使蛋白质变性沉淀。
...+
2.酚是蛋白质变性剂,用酚抽提细胞DNA时,具有两方面的作用:
①是蛋白质变性;
②由于它能使蛋白质变性,故也能使核小体和核糖体解聚,释放出DNA
和RNA,提高DNA的得率。
3.用酚一氯仿抽提DNA时,通常要在氯仿或酚一氯仿中加少许异戊
醇。这是因为,异戊醇是一种有机溶剂,可以降低表面张力,从而减少
气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、
中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
4.K:①
同其他水解蛋白酶相比,蛋白水解酶具有两个显著的优点水解
②
能力强,作用范围广;在SDS和EDTA中仍保持高活性,可以同SDS和
EDTA同时使用。
5.在分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目
的是螯合Mg2+抑制核酸酶的活性。
6.用乙醇沉淀DNA时,通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子,如NaCl
和NaAc,其目的是中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力。
7.DNA:4~5°C-20°C-70°C,-
通常可在三种温度下保存、、其中以
70°C最好。
①②
8.引物在因工程中至少有四个方面的用途:合成探针;合成
③
cDNA;用于PCR反应;
④进行序列分析。
9.Clar发现用DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端,而是有一
个突出碱末端的双链
DNAPCRT
分子。根据这一发现设计了克隆产物的载体。
1%
10.在用SDS分离DNA时,要注意SDS的浓度,0.和1%的SDS的作
用效果是不同的,前者只
RNA,DNARNA
将分离出来后者可将和一同分离出来。
11.DNA
在分离过程中,通常要进行透析,其目的是除去小分子的无机
离子。
①
12.在分离质粒DNA的菌体培养过程中,加入氯霉素有两个好处:可以
扩增质粒DNA;
②抑制菌体数量,有于裂解。
13.在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素很多,主
①②
要有:核酸酶降解;化学降解;
③物理剪切。
14.在DNA保存液中,常加一滴氯仿,主要是起抑制真菌污染的作
用。
15.按照人们的意愿,改变因中碱的组成,以达到因突变的技术
称为定点突变。
16.cDNAS1
在的合成中要用到核酸酶,其作用是切除在第二链合成时
形成的发夹环。
17.在简并引物的设计中,常常要用到di
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