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离心技术和物质代谢实验;离心技术;基础原理;

RCF(relative?centrifugal?force)：相对离心力

rpm(revolutionsperminute)：每分钟转速

低速离心时常以转速“rpm”来表示

高速离心时则以“g”表示

;沉降系数（S）:超速离心时，颗粒在离心场中沉降速度用沉降系数来表示，即物质在单位离心力场下沉降速度。

单位：Svedberg，1S=10-13s

是是物质特有物理常数，可间接反应分子量大小。

离心分离技术基础理论数据，与物质大小、形状、密度及介质密度、粘度都相关，经过对离心力和离心介质选择，即可分离纯化出不一样质量大小和物理形状物质。

;另外，对一些生物高分子或亚细胞器组分化学结构、分子量尚不了解时，可用沉降系数对其物理特征进行初步描述，将其区分开来，如原核生物核蛋白体RNA（rRNA）分为5S、16S、23S，即是依据其在离心场中行为来进行分类。

;离心机类型和主要结构;

主要结构

转头，离心管和管帽，制冷系统，真空系

统，制动装置，指示表盘

;转头;2．荡平式转头：

这种转头是由吊着4或6个自由活动吊桶(离心套管)组成。

3．区带转头：

区带转头无离心管，主要由一个转子桶和可旋开顶盖组成。

4．垂直转头：

其离心管是垂直放置。

5．连续流动转头：

转头与区带转头类似，由转子桶和有入口和出口转头盖及从属装置组成。

最大额定转速——一定使用程度，使用一定次数或一

定时间后递减10%。

;离心管;离心操作注意事项;装载溶液时，要依据各种离心机详细操作说明进行，依据待离心液体性质及体积选取适合离心管，有离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀;而制备性超速离心机离心管，则经常要求必须将液体装满，以免离心时塑料离心管上部凹陷变形。

若要在低于室温温度下离心时。转头在使用前应放置在冰箱或置于离心机转头室内预冷。

离心过程中不得随意离开;物质代谢试验

;试验二十一、糖酵解中间产物判定;糖??解反应过程见下列图：;将酵母液（含有葡萄糖及糖酵解全部酶）在一定介质中（适宜pH，必要金属离子等）进行保温，在酵母液中酶体系作用下，酵母液中原来含有糖就进行酵解反应，当反应进行到生成二分子磷酸丙糖，深入改变是在3－磷酸甘油醛脱氢酶催化下进行，－SH为3－磷酸甘油醛脱氢酶必需基团，加入一碘醋酸可与此酶－SH起反应，从而使酶失去活性，酵解反应就停留在磷酸丙糖阶段。

酶-SH+ICH2COOH→酶S-CH2COOH+HI;然后以硫酸肼为稳定剂，保护磷酸丙糖不致自发分解，使其不能向其它方向改变，结果磷酸丙糖在反应体系中堆积，从而与2，4－二硝基苯肼反应生成对应苯腙，后者在碱性溶液中溶解呈紫红色，可借此判定丙糖之生成。;离心技术和物质代谢实验;【试验方法】

取试管3支，编号，按下表进行操作．

统计三管所发生情况，并加以简明分析．

CCL3COOH作用：强酸，使糖酵解全部酶失活。

一碘醋酸作用：使3－磷酸甘油醛脱氢酶失活。

硫酸肼作用：稳定磷酸丙糖，使其不向其它方向转变。

;试剂（ml）;试验注意事项：

成腙反应前，溶液必须先碱化并在室温放置10min，目标是使磷酸丙糖中磷酸基水解脱去，生成颜色比较稳定；

一碘醋酸和三氯乙酸是酶抑制剂，使用移液管后必须彻底清洗移液管，不然易造成试验失败。

;血清胆固醇测定（酶法）;

血清中总胆固醇包含胆固醇酯(CE,70%)和游离型胆固醇(FC,30%)。胆固醇酯酶（CEH）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）作用下氧化生成Δ-4--胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶（POD）催化与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，生成红色醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇含量呈正比，在500nm波优点测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇含量。反应式以下：;

1.标本：不溶血血清或血浆标本。血浆用肝素钠、EDTA抗凝，不可用草酸盐、氟化物。

2.取试管3支，编号，按下表操作。

;【计算】

ΔA标本

CHO（mmol/L）=——————×标准液浓度

ΔA标准