SN∕T 4784-2017 出口食品中诺如病毒和甲肝病毒检测方法 实时RT-PCR方法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T4784—2017

出口食品中诺如病毒和甲肝病毒检测方法实时RT-PCR方法

QualitativedetectionofNorovirusandHepatitisAvirusinfoodforexport—Real-timeRT-PCR

2017-05-12发布2017-12-01实施

中、华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T4784—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国烟台出入境检验检疫局、中华人民共和国丹东出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：赵玉然、尹伟力、薛晓宁、岳志芹、房保海、张瑾、麻丽丹、刘鑫、郑小龙、孙涛、王群。

1

SN/T4784—2017

出口食品中诺如病毒和甲肝病毒检测方法实时RT-PCR方法

1范围

本标准规定了软果、硬果、瓶装水和贝类中诺如病毒GI、GⅡ型和甲肝病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。

本标准适用于软果、硬果、瓶装水和贝类中诺如病毒GI、GⅡ型和甲肝病毒的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

3术语和定义及缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1

诺如病毒Norovirus

诺如病毒为单股正链RNA病毒，属于人类杯状病毒属，是一种引起非细菌性急性胃肠炎的病毒。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，通过口-粪传播，以污染的水源、食物、贝类、物品、空气作为主要传播载体。诺如病毒可分为GI～GV五个基因群，其中引起人类感染的主要是GI和GⅡ群。

3.1.2

甲肝病毒HepatitisAvirus

甲肝病毒为单股正链RNA病毒，微小RNA病毒科中，嗜肝RNA病毒属，该属仅有HAV一个种。人类感染HAV后，大多表现为亚临床或隐性感染，出现呕吐、腹泻、黄疸症状，该病毒主要通过粪-口途径传播，以污染水源、食物、海产品(如毛蚶等)、食具等作为传播载体。

3.1.3

Ct值cyclethresholdvalue

荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

3.1.4

过程质控物质processcontrolmaterial

通过添加与目的病毒类似、已知含量的外源质控物质，来监测整个检测过程，包括病毒收集、核酸提取与实时荧光RT-PCR过程，通过对最终过程质控物质回收率的计算，来评价整个检测过程的有效性。

3.1.5

外源质控RNAexternalcontrolRNA

在实时荧光RT-PCR过程中通过添加与目的检测RNA相似或相同的、已知含量的外源对照

2

SN/T4784—2017

RNA,用于检测RNA逆转录过程中有无抑制剂成分。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。NV:诺如病毒(Norovirus)

HAV:甲肝病毒(HepatitisAvirus)

RT-PCR:逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction)

PC:过程质控(processcontrol)

ECRNA:外源质控RNA(externalcontrolRNA)

4试剂

所有实验用试剂均为分析纯：除特别说明外，实验用水为蒸馏水或去离子水。

4.1果胶酶，来源于黑曲霉(Aspergillusniger)(20U/mg)。

4.2蛋白酶K(20mg/mL)。

4.3TGBE缓冲液见A.1。

4.4PEG缓冲液见A.2。

4.5PBS缓冲液见A.3。

4.6盐酸溶液见A.4。

4.7氢氧化钠溶液见A.5。

4.8硫氰酸胍裂解缓冲液见A.6。

4.9氯仿。

4.10正丁醇。

4.11磁珠法RNA提取试剂盒。

4.12下列物质均购自于ATCC:

a)Mengo