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实验一、动、植物组织总RNA的提取

一、材料、试剂和仪器

材料：动物组织，一次性塑料手套，200μl、1000μl吸头。

试剂：TRIzol总RNA提取试剂，氯仿，异丙醇，0.1％DEPC，75％乙醇（用RNase-free

水配制），RNase-free水。

仪器：烘箱，超低温冰箱，高速冷冻离心机，普通离心机，高压灭菌锅，微量取样器，

研钵

二、提取操作步骤

1、匀浆处理：

a、动物组织：以鼠肝脏RNA提取为例。取新鲜或-70C冻存组织，大约10-30mg组织

加1m1TRIquick，用一次性组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

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b、单层培养细胞：直接在培养板中加入TRIquick裂解细胞，每10cm面积加1ml

TRIquick。用取样器吹打混匀。

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c、细胞悬液：离心收集细胞。每5-10×10动物、植物和酵母细胞或每10细菌细胞加

1mlTRIquick。

d、血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10

分钟，8，000-10，000rpm离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每100-200μl

血液收集的白细胞沉淀加入1mlTRIquick。

2、将匀浆样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。如不连续进行实验，

加入TRIquick的匀浆样品可在－70C下保存1-2个月。

3、可选步骤：4℃12，000rpm离心5-10分钟，取上清。如果样品中含有较多蛋白、

脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、

高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄

清的匀浆溶液进行下一步操作。

4、每使用1mlTRIquick向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室

温放置3-5分钟，使其自然分相。如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟代替。

5、4℃12，000rpm离心10-15分钟。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色

的水相，RNA主要在水相中，把水相（通常为550μl）转移到新管中。

6、在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，混匀，室温放置10-20分钟。

7、4℃12，000rpm离心10分钟。去上清。离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心

后在管侧和管底形成胶状沉淀。

8、加入1ml75％乙醇（用RNase-free的水配置）洗涤沉淀。每使用1mlTRIquick，至

少加1m175％乙醇。

9、4℃7，000rpm离心5分钟，弃上清；短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注

意不要吸取到沉淀。转速不要超过7，000rpm，否则盐离子会沉淀下来，导致RNA不易溶

解。

10、室温放置晾干（不要晾的过干，RNA完全干燥后会很难溶解，大约晾干1-2分钟

左右即可），加入适量RNase-free水（根据实验需要加入30-100μl水），充分溶解RNA。

11、RNA样品－70℃下保存。

预防RHase污染，应注意以下几方面：

1、经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

2、使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3、RNA在TRIquick试剂中时不会被RNase污染。但提取后继续处理过程中应使用不

含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5MNaOH

中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4、配制溶液应使用RNase-free的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终

浓度0.1％(v／v)，放置过夜，高压灭菌）。

不同组织或细胞RNA提取预期得率