液相色谱操作入门基本概念.pdfVIP

1，CDER评审官指南色谱分析方法的验证（1994年11月）对

用于评估系统适应性的典型参数进行了定义和讨论。

2，欧洲药典和美国药典有这方面的具体要求吗?在药典上没看到

啊?

我们出口欧洲和美国的:对照品一份连续进样5~6针,计算RSD,样品称取2份,每份进样2针

最后回标对照品是什么意思?我们对照品一般是6个月标一次的.

没错,美国药典有具体要求.

最后回标对照品指的是进完样品后,再进一针对照品,明白了吗?

呵呵,你们工作没做好

最后你指的应该是工作对照品每隔6个月复标一次.

应该是指你的分析时间超过几小时后必须进一针对照品吧,

如果你只有一个样品,而且很快能分析完,就不必再进对照品了,是吗?朋友

5定性依据的是保留时间。

定量依据的是与对照品的比对。

HPLC中常用的定量方法（主要以峰面积为基础），有：外标一点法，外标两点

法，外标标准曲线，内标一点法，内标两点法，内标标准曲线；归一化法在一定

的条件下也可以用作定量。

6降低流速，可以使两物质的保留时间显著延长，也

就是两物质在柱上的保留增强，因此两物质的分离度

应会有一定的提高，但是由于保留时间变长所有纵向

扩散会明显增加，表现为色谱峰变宽。分离度增加可

以减少干扰峰对样品的干扰，但是流速慢会使峰变宽，

使柱效明显下降，延长了分析时间。所以色谱方法的

目标，使分离度达到1.5以上，尽可能的提高分析速

度。

高效液相色谱定量分析外表一点法的主要误差来源是什么?

1、称样

2、液相系统（进样）

3、方法设计，系统适用性、精密度、线性范围

.耐用性

ICHQ2A和ICHQ2B对耐用性是有论述的，它衡量的是分析方法在细微的变化

下不受影响的能力。该实验应当是在分析方法开发过程中进行的，对实验结果进行讨

论和/或递交。如果观察到有影响，需提供代表性仪器输出（如色谱图）。

保留温度的作用是在程序升温达到一个平台保留一段平衡时间,可以起到缓冲和

稳定作用,主要是平衡时间.

当然是要逐级稀释啦，有标准规定一次稀释不能超过100倍的

对，在稀释倍数很大的情况下，由于现在移液器的精密度的影响，必须采用逐步稀释来减小

误差！

被稀释溶液取样的绝对误差对稀释后溶液浓度相对误差的贡献大小问题。如果注意到无论是

体积还是质量，取样的时候都是产生的绝对误差就明白了。

稀释100倍，取1ml浓溶液稀释到100ml，如果取样误差是0.02ml，那么会造成稀释后稀溶

液浓度存在2%的相对误差。

如果你分2次，每次稀释10倍，那么你每次要取10ml浓溶液，稀释到100ml，取样误差这

时候仍然是0.02ml，那么每次带来的稀溶液相对误差就只有千分之二，两次就算命苦最终

被叠加了，也只有千分之四，远小于一次稀释的百分之二。

哦，当然，如果你分2次的时候是每次取1ml，稀释到10ml，那么你的相对误差反倒是百

分之四，更不准了。

。

所以逐级稀释并不一定就更好，更好的前提是每次稀释后体积相同。或者进行上面的误差计

算看看结果

色谱峰的纯度：就是峰里面没有包埋了其他物质的峰.很多以前做的方法,用现在的柱效高的

柱子做,结果原来的峰变成了两个峰.所以现在做色谱含量方法都应该做个峰纯度的检测,不

过以前(甚至现在)认为,只要线性、回收率、重现性、阴性(中药的阴性很多都没意义)实验能

做出来并达到要求就代表峰是纯的了.

加标回收实验;是化学分析中常用的实验方法,也是重要的质控手段,回收率

是判定分析结果准确度的量化指标。加标实验及回收率的计算并不复杂,加标方

式可根据不同项目、不同分析方法和不同的需要灵活掌握,回收率的计算也各不

相同,通常回收率(记作R)计算的定义公式：

R=（加标试样测定值-试样测定值）/加标量×100

通常要求在90%-110%

1加标实验的一般原则

(1)一致原则：样品与加标样同时按同一操作步骤和方法测定,保证实验条件一

致。为提高准确度,样品和加标样可分别进行平行测试。

(2)可比原则：加标样中原始样品的取样体积、稀释倍数及测试体积,尽可能与样

品测试时一致。

(3)相近原则：加标量应与样品中相应待测物含量相近,一般为试样含量的0.5～

2倍,加标后的总量不超过测定上限,如含量小于检出下限时,可按检出限量加标。

(4)不变原则：加标物的浓度宜高,加标