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第六章丹参酮IIA磺酸钠相关杂质及稳定性分析

6.1丹参酮IIA磺酸钠相关杂质及结构鉴定

丹参酮IIA磺酸钠原料在生产和储存过程中都会出现稳定性问题，如酸性增

强、含量降低等现象，质量标准中监控其相关物质成为必要，提供高纯度的相关

物质对照品成为很大挑战。随着药品质量标准提高，ICH要求尽可能提供单杂大

于0.1%的相关物质结构和可能的产生机制，构效关系和药理毒数据等。因此我

们从丹参酮IIA磺酸钠原料生产过程中的精制母液中分离纯化获得相关物质，并

1

和丹参酮IIA磺酸钠原料中的相关物质进行HPLC对照，再通过LC-MS和H-NMR

分析，最终确定其结构。

n

BaolinWang等从丹参酮IIA磺酸钠原料中通过色谱分离纯化、LC-MS和

NMR鉴定推测出八种相关物质；QiaogenZou等从丹参酮IIA磺酸钠原料中通过

色谱分离纯化、UV、LC-MS和NMR鉴定推测出六种相关物质。而其磺化过程中的

副产物和杂质成分研究还不够完善，我们通过制备液相技术分离纯化丹参酮IIA

磺酸钠精制母液中的组分，寻找确定丹参酮IIA磺酸钠原料中的相关物质，通过

分子量和氢谱数据鉴定出三种相关物质结构，分别确证为丹参酮IIB磺酸钠（2）、

丹参酮I磺酸钠（4)\紫丹参甲素磺酸钠（5/6），其中4已作为药典标准中的杂

质对照品（中国药典2000年版二部附录VB），但2和5/6尚未见有文献报道得

到纯物质。[1,2]

6.1.1仪器与原料

VarianSD-1液相制备及色谱装填系统，色谱柱LL4001,1inch.×25cm，色

谱柱4002,2inch,×25cm；孔径12nm粒径5μm色谱填料ODS-AQ100g，理论工

作压力1500psi，YMC;孔径12nm粒径10μm色谱填料PLRP-S150g，理论工作压

力650psi，AngilentTechnologies；Waters2695/2489高效液相色谱仪；色谱

柱AngilentExtendC185μm，4.6×15cm；400M核磁共振波谱仪，NMRAvance

III400MHz，瑞士公司；超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用仪，

ACQUITYTIMUPLCQ-TOFMSPremier，USAWaters公司。

丹参酮IIA磺酸钠车间精制母液（自制）；纯化水；甲醇，HPLC,Tedia、Fisher

Scientific和Merk；三乙胺（TEA),HPLC,Tedia。

6.1.2方法

6.1.2.1样品前处理

丹参酮IIA磺酸钠车间精制母液进行相关物质富集前先在37℃条件下减压

旋蒸结晶后滤纸过滤在经过0.22μm有机相微孔滤膜做过滤除菌处理。

6.1.2.2富集和进一步纯化

选用装填PLRP-S聚合物填料的VarianLL4002色谱柱。实验体系为甲醇/

水，20%～80%梯度洗脱，流速为100mL/min，检测波长为271nm。根据紫外检测

结果实时收集样品。

6.1.2.3二步纯化及精制

选用装填ODS-AQ硅胶填料的VarianLL4002色谱柱。实验体系为0.1%TEA-

甲醇/0.1%TEA-水，20%～60%梯度洗脱，流速为25mL/min，检测波长为271nm。

根据紫外检测结果实时收集样品。

6.1.2.4HPLC检测

在富集、纯化精制过程中采用HPLC方法对样品组成及含量进行全程监测。

HPLC监测体系为：AgilentExtendC18，5μm，4.6*150mm,流速为1mL/min，检

测波长为271nm。

6.1.2.5冻干

经HPLC检测纯度98%的样品进行冻干保存。

6.1.2.6结构鉴定

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将完成冻干的样品，进行LC-MS和H-NMR检测。

6.1.3结果与讨论

6.1.3.1丹参酮IIA磺