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中药化学实验

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“中药化学实验技术”实验教学大纲

实验大黄中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚

的提取、分离和鉴定

一实验目的和要求：

掌握pH梯度萃取法的原理和操作技术。

学习硅胶柱色谱法分离精制大黄素。

学习离心薄层色谱法、快速制备液相色谱法分离精制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。

了解高速逆流色谱法的分离原理和方法。

学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。

二实验原理

大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（RheumpalmatclmL），药用大黄（R.officinaleBaill）及唐古特大黄（R.tangutiumMaxim.etRegll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。羟基蒽醌苷元主要有下列五种：

中药化学实验全文共1页，当前为第1页。

中药化学实验全文共1页，当前为第1页。

R1

R2

名称

晶形

熔点

-H

-COOH

大黄酸(Rhein)

黄色针晶

318~320℃

-CH3

-OH

大黄素(Emodin)

橙色针晶

256~257℃

-H

-CH2OH

芦荟大黄素(Aloe-emodin)

橙色细针晶

206~208℃

-OCH3

-CH3

大黄素甲醚(Physcion)

砖红色针晶

207℃

-H

-CH3

大黄酚(Chyrsophanol)

金色片状结晶

196℃

酸性强弱：

大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄酚≈大黄素甲醚

极性强弱：

大黄酸＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄甲醚＞大黄酚

三实验方法

酸水解

取大黄粉10g，加20%的硫酸水溶液100ml，直火加热1小时，过滤，滤饼水洗中性，干燥。

总羟基蒽醌苷元的提取

干燥的滤饼置索氏提取器中，加入乙醚，回流提取2.5小时，得乙醚提取液。

pH梯度萃取法分离大黄中的蒽醌苷元

乙醚液

2.5%NaHCO350ml(分三次)

碱液乙醚液

盐酸调pH=2 2.5%Na2CO350ml（分三次）

沉淀

(大黄酸)

碱液乙醚液

盐酸调pH=2 5%Na2CO360ml(分四次)

沉淀

(大黄素)碱液 乙醚液

盐酸调pH=21%NaOH60ml

盐酸调pH=2

(分四次)

沉淀

(芦荟大黄素)碱液乙醚液

(大黄酚+大黄素甲醚)

萃取效果以TLC来确定。

4五种羟基蒽醌苷元的分离精制

（1）大黄酸的精制

将2.5%NaHCO3萃取物干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。

中药化学实验全文共2页，当前为第2页。（2）用硅胶柱色谱法分离精制大黄素

中药化学实验全文共2页，当前为第2页。

①装柱：取100－200目的硅胶约10g，按干法或湿法装柱

②加样：湿法或干法上样大黄素粗品。

③洗脱，鉴定，合并：用石油醚：乙酸乙酯（7：3）为洗脱剂洗脱，分段收集，用硅胶薄层跟踪检查。合并大黄素部分。

④放置析晶：大黄素部分适当浓缩，放置析晶，得纯品大黄素。

（3）芦荟大黄素的精制

PH梯度萃取法得到的芦荟大黄素沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。

（4）用离心薄层层析法分离大黄酚和大黄素甲醚

①圆形硅胶薄层板的制备：硅胶G-CMC-Na（30g+75~80ml0.4%CMC-Na）

②进样：大黄酚和大黄素甲醚混合物

③洗脱：石油醚—乙酸乙酯

④鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲醚。

（5）用快速制备液相色谱法分离大黄酚和大黄素甲醚

吸附剂：硅胶

洗脱剂：石油醚—乙酸乙酯

鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲醚。

5大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的鉴定

(1)颜色反应

大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚与碱及醋酸镁的颜色反应并与茜草素比较颜色的不同。

(2)熔点测定

大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚

(3)TLC

大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的薄层鉴定

(4)IR

用溴化钾压片法，测定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的红外光谱。

四实验指导

1．本实验要点及注意事项。

中药化学实验全文共3页，当前为第3页。①PH梯度萃取的原理及注意事项。

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