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第三节DNA复制(Replication);DNA做为遗传物质的基本特点就是在细胞分裂前进行准确地自我复制(selfreplication);遗传物质传递的稳定性和精确性;第三节-2DNA-复制;DNA复制的完成是细胞分裂的触发点,复制后的基因组被平均分配到两个子细胞中去。细胞周期调控基因控制DNA的复制并触发细胞分裂。
;一、半保留复制(semioconservetivemodel)的验证
半保留模型全保留复制模型分散模型;中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试:
请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的(8分)。;“Heavy”DNA;2、定义:;二、复制起点方向和速度;2、复制叉(Replicationfork):
染色体中参与复制的活性区域,即复制正在发生的位点;从复制原点到终点,组成一个能够独立进行复制的DNA复制单位叫复制子;复制方向(复制过程的顺序性):大多数双向进行,也有一些单向的,或以不对称的双向方式进行的。;;5、复制方式;(1)共价延伸:亲本链的3-OH发生
DNA聚合;;第三节-2DNA-复制;真核rDNA的扩增,
F因子DNA的转移,
λ噬菌体裂解途经的复制,
φX174,M13,G4等。
单链环状DNA噬菌体第二阶段复制都是进行滚环复制的.
;2)Dloop;;三、原核生物DNA复制的特点;大肠杆菌DNA复制起始点结构;大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合
;在HU蛋白和ATP的共同作用下,Dna复制起始复合物使3个13bp直接重复序列变性,形成开链;解链酶六体分别与单链DNA相结合(需DnaC帮助),进一步解开DNA双链;;大肠杆菌复制原点的结构特点是:;;生物体含有多种解螺旋
具有ATPase活力
分离1个碱基度对,消耗2个ATP
特性不同,移动的极性也不同:
Dna蛋白沿5‘-3’方向移动,PriA,Rep蛋白沿3‘-5’方向移动。;2)单链结合蛋白;3)拓扑异构酶(topoisomerase):催化DNA由一种拓扑异构体转变成另一种拓扑异构体的酶类;;结合到一条链上形成复合物;图2-21拓扑异构酶Ⅰ的作用机制;拓扑异构酶Ⅱ-TopII引入负超螺旋;拓扑异构酶的生物学功能;4)DNA连接酶;预引发:解旋解链,形成复制叉:;引发酶:它是一种特殊的RNA聚合酶,可催化短片段RNA的合成。这种短RNA片段一般十几个至数十个核苷酸不等,它们在DNA复制起始处做为引物。RNA引物的3′-OH末端提供了由DNA聚合酶催化形成DNA分子第一个磷酸二酯键的位置。
;;;三)原核生物DNA复制延伸;;a、DNA聚合酶I:;5‘→3’聚合功能;3‘→5’外切活性;第三节-2DNA-复制;DNApolⅠ的5’-3’外切活性有以下三个特点:
?必须有5’-磷酸末端
?被除去的核苷酸必须是已经配对的
?被除去的可以是脱氧核糖核苷酸
(1)切口平移(nicktranslation);
(2)链的置换;
(3)模板转换(template-switching);为了保证遗传的稳定,DNA的复制必须具有忠实性。1.遵守严格的碱基配对规律;
2.DNA聚合酶在复制时对碱基的正确选择;
3.对复制过程中出现的错误及时进行校正。;b、polⅢ
由十种亚基组成,其中α亚基具有5→3聚合DNA的酶活性,因而具有复制DNA的功能;而ε亚基具有3→5外切酶的活性,因而与DNA复制的校正功能有关。;2、DNA链的延伸过程;图5-7DNA的半不连续复制;4)在DNA复制过程中,前导链能连续合成,而滞后链只能是断续的合成5??3?的多个短片段,这些不连续的小片段称为冈崎片段(Okazakifragment)。
;前导链和后随链的协同合成;第三节-2DNA-复制;武汉大学2003年硕士研究生入学分子生物学试题:
Replicon、semi-conservativereplication;第三节-2DNA-复制;;第三节-2DNA-复制;DNA生物合成过程
;五、真核生物复制特点;酵母中约含400个复制子,每一个约36kb;ARS分为A,B,C三个功能区。
A区为15bp,其中11个保守,称ACS。起始蛋白的结合位点
B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区,富含AT,是DNA溶解区。
B3是ABF1(转录因子)结合区,;起始点识别复合物ORC(originrecognizingcomplex):;2、真核生物的DNA聚合酶;真核细胞在DN
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