第三节 DNA复制课件.pptVIP

第三节DNA复制（Replication）;DNA做为遗传物质的基本特点就是在细胞分裂前进行准确地自我复制(selfreplication);遗传物质传递的稳定性和精确性;第三节-2DNA-复制;DNA复制的完成是细胞分裂的触发点，复制后的基因组被平均分配到两个子细胞中去。细胞周期调控基因控制DNA的复制并触发细胞分裂。

;一、半保留复制（semioconservetivemodel）的验证

半保留模型全保留复制模型分散模型;中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试：

请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的（8分）。;“Heavy”DNA;2、定义：;二、复制起点方向和速度;2、复制叉（Replicationfork）：

染色体中参与复制的活性区域，即复制正在发生的位点;从复制原点到终点，组成一个能够独立进行复制的DNA复制单位叫复制子;复制方向（复制过程的顺序性）：大多数双向进行，也有一些单向的，或以不对称的双向方式进行的。;;5、复制方式;（1）共价延伸：亲本链的3-OH发生

DNA聚合；;第三节-2DNA-复制;真核rDNA的扩增,

F因子DNA的转移,

λ噬菌体裂解途经的复制,

φX174,M13，G4等。

单链环状DNA噬菌体第二阶段复制都是进行滚环复制的.

;2)Dloop;;三、原核生物DNA复制的特点;大肠杆菌DNA复制起始点结构;大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合

;在HU蛋白和ATP的共同作用下,Dna复制起始复合物使3个13bp直接重复序列变性,形成开链;解链酶六体分别与单链DNA相结合(需DnaC帮助),进一步解开DNA双链;;大肠杆菌复制原点的结构特点是：;;生物体含有多种解螺旋

具有ATPase活力

分离1个碱基度对，消耗2个ATP

特性不同，移动的极性也不同：

Dna蛋白沿5‘－3’方向移动，PriA,Rep蛋白沿3‘－5’方向移动。;2）单链结合蛋白;3）拓扑异构酶（topoisomerase）：催化DNA由一种拓扑异构体转变成另一种拓扑异构体的酶类;;结合到一条链上形成复合物;图2-21拓扑异构酶Ⅰ的作用机制;拓扑异构酶Ⅱ－TopII引入负超螺旋;拓扑异构酶的生物学功能;4）DNA连接酶;预引发：解旋解链，形成复制叉：;引发酶：它是一种特殊的RNA聚合酶，可催化短片段RNA的合成。这种短RNA片段一般十几个至数十个核苷酸不等，它们在DNA复制起始处做为引物。RNA引物的3′-OH末端提供了由DNA聚合酶催化形成DNA分子第一个磷酸二酯键的位置。

;;;三）原核生物DNA复制延伸;;a、DNA聚合酶I：;5‘→3’聚合功能;3‘→5’外切活性;第三节-2DNA-复制;DNApolⅠ的5’－3’外切活性有以下三个特点：

?必须有5’－磷酸末端

?被除去的核苷酸必须是已经配对的

?被除去的可以是脱氧核糖核苷酸

(1)切口平移（nicktranslation）；

(2)链的置换；

(3)模板转换（template-switching）;为了保证遗传的稳定，DNA的复制必须具有忠实性。1．遵守严格的碱基配对规律；

2．DNA聚合酶在复制时对碱基的正确选择；

3．对复制过程中出现的错误及时进行校正。;b、polⅢ

由十种亚基组成，其中α亚基具有5→3聚合DNA的酶活性，因而具有复制DNA的功能；而ε亚基具有3→5外切酶的活性，因而与DNA复制的校正功能有关。;2、DNA链的延伸过程;图5-7DNA的半不连续复制;4）在DNA复制过程中，前导链能连续合成，而滞后链只能是断续的合成5??3?的多个短片段，这些不连续的小片段称为冈崎片段(Okazakifragment)。

;前导链和后随链的协同合成;第三节-2DNA-复制;武汉大学2003年硕士研究生入学分子生物学试题：

Replicon、semi-conservativereplication;第三节-2DNA-复制;;第三节-2DNA-复制;DNA生物合成过程

;五、真核生物复制特点;酵母中约含400个复制子，每一个约36kb;ARS分为A,B,C三个功能区。

A区为15bp,其中11个保守，称ACS。起始蛋白的结合位点

B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区，富含AT，是DNA溶解区。

B3是ABF1（转录因子）结合区，;起始点识别复合物ORC(originrecognizingcomplex)：;2、真核生物的DNA聚合酶;真核细胞在DN