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RNA干扰Nucleostemin基因对人食管癌Eca109细胞株增殖影响的实验研究

RNA干扰Nucleostemin基因对人食管癌Eca109细胞株增殖影响的实验研究RNA干扰Nucleostemin基因对人食管癌Eca109细胞株增殖影响的实验研究作者：

郑学芝，刘桂莲，李丽，孙卫，念红，胡静,蔡子微【摘要】目的筛选NS基因特异性siRNA阳性细胞克隆，研究NS基因特异性RNA干扰对Eca109细胞株体外增殖能力的影响。

方法用脂质体法将NS特异性siRNA表达载体转染Eca109细胞，Zeocin抗生素压力筛选后用PCR方法鉴定阳性克隆；MTT法检测各组细胞的生长增殖情况，RTPCR方法检测NS基因表达量的变化情况。

结果与对圭照组比较，silencer组肿瘤细胞授趋于分化，细胞增殖抑制率超过80%(绗P【关键词】Nucleostemi拄n;RNA干扰；食管癌；基因表达；细胞增殖Abstract：

Objec付tiveToscreenNSge蕙nespecificpositivecellclones,andinve梭stigatetheeffectof份humanesophaguscanc珀erEca109cellsprol彩iferationinvitroby绺NSgenespecificRNA铍TheNSsiRNAexpressionvectorwastransfectedintohumanesop镯haguscancerEca109曲cellsusingLIPOFECT境AMINETM2000Reagent缘,andpositiveclones廖wereexaminedbyPCRa敲fterstabletransfec撺tansscreeningwithZ剀eocin;detectedthe蒺cellproliferationbｐyMTTassayandthelevelsofNSgeneexpre那ssionbyRTComparedwiththetwocontrol邺groups,thesilencer讣groupcellswerenear毗erdifferetiation,t蒺heproliferationinh畹ibitoryratewashigh楮erthan80%(PKeywords：

Nucleostemin;R廉NAinterference;ぉEsophaguscancer；Ge嗜neexpression;Cell南proliferation0引言稞NS基因是美国国立卫生研究院的学者鄯MckayandTsai2002年盈新发现的一种蛋白质核因子［1］，该基抹因在干细胞及人类的数种肿瘤细胞中表达于丰度很高，但在分化的成体组织中，该基灯因却不表达。

二位学者提出干细胞与癌细☆胞均由相同的蛋白质－NS来决定其细胞呸自我复制的能力，NS可能是干细胞和肿燹瘤细胞通过G2/S检验点的特异性调控呕因子。

本文将以人食管癌Eca109辕细胞株为实验材料探讨NS基因特异性R闽NA干扰对食管癌Eca109细胞株体外增殖能力的影响。

1材料和方法材料人食管癌Eca109细胞购芸于上海细胞所；1640培养基、胎牛血钝清、胰蛋白酶为Gibco公司；PCDNA4/CNSsilencer质ｚ粒[2]；MTT、DMSO、Zeoc曲in、LipofectamineTM鳗2000Reagent：

Invitr倡ogen公司;RNA、DNA试剂盒;螺RTPCR试剂盒：

TaKaRa公司赦;引物合成：

上海申能博彩生物科技有限蒴公司。

方法细胞培养及NS基因祁转染人食管癌Eca109细胞培捺养于含10%FBS的RPMI1640方培养基中，置于37℃、5%CO2潮湿皂空气的CO2培养箱内培养。

脂质体法将鄢PCDNA4/CNSsilenc转er质粒及空载体PCDNA4/Cv亥ector质粒转染Eca109细胞韩，分别命名为silencer