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离心机技术－－沉降系数的测定

沉降系数测定是分析离心机最主要的用途。通常只需要几十毫

克甚至几十微克样品，配制成1~2毫升溶液，装入分析池，以

几小时的分析离心，就可以获得一系列的样品离心沉降图。根

据沉降图可以作样品所含组分的定性分析，亦可以测定各组分

的沉降系数和估计分子大小，作样品纯度检定和不均一性测定，

以组分的相对含量测定。

1.原理

沉降系数的测定原

理就是在恒定的离心力

场下测定样品颗粒的沉

降速度。因为样品颗粒

很小，不能直接看到它

们的沉降运动，所以把

离心时样品颗粒的界面

移动速度看作是样品颗

粒的平均沉降速度。通

常使用Schlieren和吸

收光学系统来记录界面

沉降图。在沉降图中样

品界面一般表现为一个

对称的峰，峰的最高点

代表界面位置。通常沉

降系数测量精度为±

2%,但是如果面界图型

表现为不对称峰型，或

希望沉降系数测量精度

达到±1%或更小的情况

时，按峰的最高点作为

界面位置就不够了这时

应该使用二阶距法计算

界面位置。

2.沉降系数测定实例

⑴样品：牛血清白

蛋白

⑵样品溶液与离心：按0.6%浓度将牛血清白蛋白溶于0.14M

NaCl、0.01M磷酸缓冲液中，pH7.0。用12mm厚双槽分析池，一

边加入溶液一边加入溶剂，约各0.3ml。分析池与平衡池平衡重

量，使平衡池比分析池轻0.5g以内，然后分别装入分析转头。

分析转头装于分析离心为什么，关转动腔，抽真空。开Schlieren

光光源，选择工作速度一60000转/分，离心室温。转动腔达到

真空后离以机开始运转加速，此时在观察窗口可以看到离心图

型。达到工作速度后即为恒速离心。待看到样品峰的尖端后即

可以6分钟间隔照相，共照6张。照完相即可关机，取出样品

液，清理转头和分析池。照相用强反差显影冲洗后即得

Schlieren光路沉降图形照片。

⑶沉降图象测量：Schlieren沉降图可以用比长仪，读数显

微镜，或投影仪测量。要求测量的横向量程为6cm，测量精度应

优于10μm。通常读数显微镜已能满足要求。投影仪可以使图象

放大于屏幕上，读测比较容易，眼睛不易疲劳。测量时把沉降

图象的底片放于测量仪器上，使液面的垂直线与测量仪中的垂

直线重合，然后用十字标线依次测量内参孔，液面，界面峰尖，

和外参考孔的位置，每个图象至少读测三次，取平均值。依次

把每个图象依同样方法测量，把数据列成表5。

表50.6%牛血清白蛋白沉降图测量值

照

x1x2x3x4(x3-xlog[5.65+(x3

相

(mm)(mm)(mm)(mm)1)/a-x1)/a]

号

145.42637.62633.80713.8100.61250.7967

245.64037.83033.35113.4200.64850.7992

345.89038.07032.89513.6630.68540.8017

445.73337.92132.16313.5230.71610.8039

545.80238.00031.58013.5930.75070.8062

646.00938.21131.17213.8000.78300.8084

(4)沉降系数S的计算：沉降图测量完，先检查每一张图和第六

张图的x2-x1值，二张图的x2-x1值的差应该小于界面

峰位置的测量误差。实测x2-x1的差值为0.002，说明液面

在离心30分钟内变动为0.002mm。界面峰在30分钟内移动距

离是第六号图的x1-x3减第一号图的x