基因诊断【102页】（最新文档）.pptxVIP

基因诊断;第一节概述;一、基因诊断的概念;二、基因诊断的特点;三、基因诊断的临床意义;第二节基因诊断的原理;基因的突变类型;第三节基因诊断的常用技术方法;（二）聚合酶链反应(PCR)

（三）基因测序

（四）基因芯片;1、限制性内切酶酶谱分析法;×;;2、DNA限制性片段长度多态性（RFLP）;RLFP分析法;3、等位基因特异寡核苷酸探针;二、PCR/单链构象多态性分析（SSCP）

;三、基因测序;（四）基因芯片

;第三节、基因诊断的应用;一、基因诊断在感染性疾病中的应用;对感染性疾病的基因诊断具有快速、灵敏、特异等优点。80年代建立的PCR技术已广泛应用于对病原体的检测。一般根据各病原体特异和保守的序列设计引物，有的还合成ASO探针，对病原体的DNA可用PCR技术直接检查，而对RNA病毒，则采用RT-PCR。现在市场已经有许多种病原体的测定药盒供应，每一盒包含扩增某种病原体的特异引物，所需的酶以及配妥的各种反应试剂，并附有可行的操作方法步骤。;病毒性感染：;乙型肝炎病毒;细菌性感染：;PCR在结核杆菌诊断中的应用;近几年兴起的PCR方法基本实现了快速、灵敏、准确地诊断结核的目的，并且该方法正趋于常规化地应用于临床一般实验室.应用PCR方法检测结核杆菌的首要条件是设计一对特异性DNA引物.该引物所引导的DNA扩增序列应是结核杆菌独有的，且是结核杆菌的保守序列，这样才能保证检测结果的特异性.PCR方法的另外几个关键因素是:①DNA提取，即对有限的结核杆菌应尽量地将其DNA完整、全部地提取;②TaqDNA聚合酶的活性;③PCR产物的检测方法，即将PCR产物进行快速、灵敏、安全、准确的检测.;寄生虫：;二、基因诊断在遗传疾病中的应用;根据不同遗传疾病的分子基础，可采用不同的技术方法进行诊断，不但可对有症状患者进行检测，而且对遗传疾病家族中未发病的成员乃至胎儿甚至胚胎着床前（preimplantation）进行诊断是否携带有异常基因，这对婚育具有指导意义。;PCR技术在苯丙酮尿症诊断中的应用;PKU的临床表现;PKU的遗传学;PAH基因突变类型;突变位点、代号所外的外显子、突变性质;PAH基因点突变的PCR检测;地中海贫血;α地贫(α-thalassemias)的分子基??主要为α珠蛋白基因缺失，也有部分病例是由于碱基突变造成的。可采用限制性内切酶图谱方法检测α珠蛋白基因的缺失。

β地贫(β-thalassemias)的基因诊断：β地贫的分子基础不同于α地贫，β珠蛋白基因通常并不缺失，而是由于基因点突变或个别碱基的插入或缺失。;PCR技术在β地贫基因诊断中的应用;恶性肿瘤;第七章基因治疗

（genetherapy）;第一节基因治疗概论;基因治疗的概念;基因治疗发展简史;基因治疗的策略;基因修正（genecorrection）：是指将致病基因的突变碱基序列纠正，而正常部分予以保留。这种基因治疗方式最后也能使致病基因得到完全恢复，操作上要求高，实践中有一定难度。

基因替代（genereplacement）：就是用正常的基因原位替换病变细胞内的致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。这种治疗方法最为理想，但目前由于技术原因尚难达到。

;基因增强（geneaugmentation）：将目的基因导入病变细胞或其它细胞，目的基因的表达产物能修饰缺陷细胞的功能或使原有的某些功能得以加强。在这种治疗方法中，缺陷基因仍然存在于细胞内，目前基因治疗多采用这种方式。如将组织型纤溶酶原激活剂的基因导入血管内皮细胞并得以表达后，防止经皮冠状动脉成形术诱发的血栓形成。;基因抑制（geneconstraint）或基因失活（geneinactivation）：

利用反义技术能特异地封闭基因表达特性，抑制一些有害基因的表达，已达到治疗疾病的目的。如利用反义RNA、核酶等抑制一些癌基因的表达，抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞的分化。用此技术还可封闭肿瘤细胞的耐药基因的表达，增加化疗效果。;免疫调节（immuneadjustment）：将抗体、抗原或细胞因子的基因导入疾人体内，改变病人免疫状态，达到预防和治疗疾病的目的。如将白细胞介素-2导入肿瘤病人体内，提高病人IL-2的水平，激活体内免疫系统的抗肿瘤活性，达到防治肿瘤复发的目的。;导入自杀基因－－细胞自杀效应：

将自杀基因转移入宿主细胞中，该基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞“自杀”，清除肿瘤细胞。;总之，基因治疗的策略较多，不同的方法在实践中各具有优缺点。而基因的治疗本身也并不局限于遗传病的治疗，现已扩展到肿瘤、病毒性疾病等。基因治疗可用于