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海地瓜小分子多肽抗氧化性研究
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摘要：
海地瓜是一种海参，体壁组织含有丰富的营养物质，具有很高的医药用和保健价值。采用复合酶解工艺制备海地瓜体壁蛋白水解多肽，利用超滤技术分离分子量小于3kDa的多肽组分，对其小于3kDa海地瓜小分子多肽体外抗氧化能力进行评价。结果表明小于3kDa海地瓜小分子多肽具有明显的清除超氧阴离子自由基和清除DPPH自由基的能力，且海地瓜小分子多肽的浓度不断增大，对超氧阴离子自由基和DPPH自由基的清除能力越大，当浓度达到120mg/mL时，对超氧阴离子自由基的清除力达到29%，对DPPH自由基的清除率高达32%。小于3kDa海地瓜小分子多肽也具有显著的还原能力，当浓度达到120mg/mL时，其还原力可达到1.8%。以上结果阐明海地瓜小分子多肽具有很好的抗氧化活性；并且丰富海地瓜多肽抗氧化研究理论，为海地瓜抗氧化多肽产品开发利用及产业工新工艺技术研究提供基础参考。
关键词：海地瓜多肽抗氧化
引言
海地瓜含有丰富的营养物质，其中包括蛋白质、脂肪、皂苷、维生素、多糖、氨基酸、多肽等多种有益于人体健康的活性物质[1-3]。海参体壁富含蛋白质，干品中蛋白质质量分数可达70%以上，是制备生物活性小分子肽类物质非常理想的原料[4-5]。海参小分子肽的生物活性研究主要在抗疲劳、抗氧化、提高免疫力、降血压、抗炎等方面[6-7]。海地瓜作为低值海参的一种，食用性不高，因此，研究海地瓜活性物质的功效，是实现海地瓜资源最大化利用的有效方式。
生物活性肽是指具有特殊生物活性的肽类[8]。本文利用海地瓜本身具有自溶特点，并且采用与外源酶相结合形成复合酶解工艺，可更有效的制备海地瓜小分子肽[12]。在选用超滤技术分离分子量小于3kDa的多肽组分，研究其小于3kDa海地瓜小分子多肽的体外抗氧化能力。
1材料与方法
材料与试剂
海地瓜木瓜蛋白酶NaOH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)
仪器与设备
millipore超滤膜设备紫外分光光度计比色皿烧杯
海地瓜小分子肽还原力的测定方法
采用李杰等方法进行测定[13]
海地瓜小分子肽对超氧阴离子自由基清除能力的测定方法
采用李润国等方法进行测定[14]。
海地瓜小分子肽对DPPH自由基清除能力的测定方法
采用李润国等方法进行测定[15-16]。
2结果与分析
2.1海地瓜小分子肽还原力的测定结果
表1海地瓜小分子肽对自由基的清除作用
1
2
3
4
小分子肽质量浓度（mg/mL）
0
40
80
120
清除率（%）
0.2
0.8
1.3
1.8
由表1可知，在0-120mg/mL浓度范围内，随着海地瓜小分子肽的浓度的不断增大，其还原效果越大，并且呈现直线上升状态。当达到120mg/mL时，清除率1.8%，说明海地瓜小分子肽对自由基的清除有效果。
2.2海地瓜小分子肽对超氧阴离子自由基清除能力的测定结果
表2海地瓜小分子肽对超氧阴离子自由基的清除作用
1
2
3
4
小分子肽质量浓度（mg/mL）
0
40
80
120
清除率（%）
2
12
21
29
由表2可以看出，在0-120mg/mL浓度范围内，海地瓜小分子肽对超氧阴离子自由基的清除能力随着浓度的增大而加强，当海地瓜小分子肽浓度达到120mg/mL时，其清除率可达到29%，其效果非常明显。
2.3海地瓜小分子肽对DPPH自由基清除能力的测定结果
表3海地瓜小分子肽对DPPH自由基清除能力的清除作用
1
2
3
4
小分子肽质量浓度（mg/mL）
0
40
80
120
清除率（%）
2
18
25
32
由表3得知，在0-120mg/mL浓度范围内，海地瓜小分子肽的浓度越大，对DPPH自由基的清效果越强，当海地瓜小分子肽浓度达到120mg/mL时，其清除率可达到32%，效果非常显著。
3讨论与结论
本实验以海地瓜为材料，根据海地瓜的自溶特点，优化其本身的自溶理化条件，混合海地瓜体壁匀浆液及高自溶能力组织匀浆液（消化道），在最优的条件下进行初酶解，在海地瓜初酶解液中加入木瓜蛋白酶进行二次酶解，并收集酶解产物。利用millipore超滤膜设备，分离海地瓜酶解产物，获得分子量小于3kDa的多肽组分。结果表明复合酶解工艺制备海地瓜体小分子肽最好。
本实验中体外抗氧化活性检测结果表明，随着海地瓜小分子多肽的浓度不断增大清除超氧阴离子自由基和清除DPPH自由基的能力也不断提高，清除自由基的效果明显。当浓度达到120mg/mL时，对超氧阴离子自由基的清除力达到29%，对DPPH自由基的清除率高达32%。小于3kDa海地瓜小分子多肽也具有显著的还原能力，当浓度达到120mg/mL时，其还原力可达到1.
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