发酵工程菌种的来源(2013).ppt

发酵工程课件

FermentationEngineering;教学目的：了解工业化菌种的要求以及一些工业化生产菌介绍；了解菌种别离的一般过程；掌握土样采集应注意的问题，菌种的别离方法；掌握优良菌种应具备的根本特性和菌种的选育、种子扩大培养。

教学重点、难点：土样采集应注意不同的土壤特点、地理和气候条件，土样的采集方法；生化反响别离法；种子扩大培养。

?;内容速览;一、工业化菌种的要求;放线菌〔链霉素、四环素、红霉素等〕;初级代谢和次级代谢异同？;概念不同;产物不同;存在范围不同;对微生物的作用不同;;可以大量积累;氨基酸生产菌的要求：;3、酶制剂生产有关的微生物;一、菌种别离的一般过程

二、微生物材料的标本采集

A、不同的土壤特点

B、地理和气候条件

C、微生物的生理特性

D、极端环境条件下采样别离

三、标本的预处理

四、目的微生物富集的一些根本方法

五、菌种别离;一、菌种别离的一般过程P14;遵循原那么：材料来源越广泛，越有可能获得新的菌种

一般通过以下途径获得菌种：

①向菌种保藏机构索取有关菌株；

②由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等；

③从一些发酵制品中别离目的菌株，如从酱油中别离蛋白酶产生菌，从酒醪中别离淀粉酶或糖化酶的产生菌。;国内菌种保藏机构27;国外菌种保藏机构;自然界中微生物极其丰富，土壤是微生物最集中的地方，所以土壤样品往往是采集的首选目标。

土样采集应注意以下问题：

A、不同的土壤特点

B、地理和气候条件

C、微生物的生理特性

D、极端环境条件下采样别离;A、不同的土壤特点P15;B、地理和气候条件

;C、微生物的生理特性;Ｄ、极端环境条件下采样别离;三、标本的预处理

提高菌种别离的效率

●物理方法：加热(55℃,6min；100℃,1h；40℃2-6h)、膜过滤法、离心法、空气搅拌法

●化学方法：含1%几丁质培养基、用CaCO3提高pH值进行培养〔链霉菌属〕

●诱饵法：用涂石蜡的棒置于碳源培养基中〔诺卡氏菌〕、花粉〔游动放线菌〕、蛇皮〔小瓶???属〕、人头发〔角质菌属〕;小瓶菌属;富集的根本方法：

1、控制营养：如以唯一碳源或氮源作底物；

2、控制培养条件：如pH、温度、通气量等；

3、抑制不需要的种类。;富集培养方法：

1、分批式富集培养：指将富集培养物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性压力，如此重复几次后，再取此富集培养物接种至固体培养基上，以获得单菌落。转种是关键。

2、恒化式富集培养：通过改变限制性基质浓度，来控制两类不同菌株的比生长速率。;五、菌种别离;1、常规别离法：平板划线法、稀释别离法和涂布法;2024/9/7;A分区划线法B连续划线法;将样品分散到最低浓度;返回;例1：别离某种产生有机酸的菌株时，在培养基中添加碳酸钙。;;;;;§3菌种选育;

〔1〕菌种细胞的生长活力强；

〔2〕生理性状稳定；

〔3〕纯、具有抗噬菌体感染的能力；

〔4〕稳定高产，与目标产品性质相近的副产物及其他产物少；

〔5〕能采用价格廉价，来源广泛的原料，并且转化效率高。;自然状态下，碱基对发生自然突变的机率为10-8～10-9;自然突变引起的原因;;自然选育操作步骤：;自然选育方法;自然选育方法;例：抗生素菌种选育;自然选育方法;自然选育方法;二、诱变育种P55;化学诱变剂;〔一〕诱变剂处理过程中几个有关的问题;化学诱变剂都具毒性，其中90%以上是致癌物质或极毒药品，使用时要格外小心，不能直接用口吸，防止与皮肤直接接触，不仅要注意自身平安，也要防上污染环境，造成公害。;NTG(亚硝基胍〕是一种强烈致癌物质，操作时要带橡皮手套，穿工作服，带口罩，用称量瓶称量，最好在通风橱中进行。凡接触过NTG的器皿必须及时、单独处理，例用自来水大量冲洗或用1-2N的NaOH浸泡过夜，洗净。

EMS〔甲基硫酸乙酯〕是剧毒的诱变剂，在整个诱变过程，包括配制药品、操作处理、保存等都要严守平安，不能接触皮肤，所有接触过EMS的器皿，单独用大量水冲洗洗涤，或用10％NaS2O3溶液浸泡过夜，再用清水冲洗干净。;定义：出发菌株指用于诱变育种的最初菌株或每代诱变的

试验菌株。;出发菌株及生理状态：真菌、酵母106个/ml，放线菌孢子106~107个/ml,细菌108个/ml，

细菌选择对数生长期，真菌和放线菌使用幼年孢子，芽孢细菌也可以用芽孢进行诱变处理。

力求90%以上为单孢子，制菌悬液用生理盐水或缓冲溶液。;3、诱变剂的选择