TCVMA-犬瘟热病毒微滴式数字RT-PCR检测方法.pdf

ICS

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团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

犬瘟热病毒微滴式数字RT-PCR检测方法

MethodofdropletdigitalRT-PCRfordetectionofcaninedistempervirus

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（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

XX/TXXXXX—XXXX

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：上海市动物疫病预防控制中心、嘉定区农业技术推广服务中心、崇明区动物

疫病预防控制中心、北京新羿生物科技有限公司。

本标准主要起草人：赵洪进、沈海潇、鞠厚斌、王建、杨德全、李鑫、、陶军、苑建军、葛菲

菲、杨显超、陶田谷晟、杨超。

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犬瘟热病毒微滴式数字RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了犬瘟热病毒（caninedistempervirus，CDV）微滴式数字RT-PCR检测的操作方法。

本标准适用于犬粪便样品中犬瘟热病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件：

BHQ：无荧光淬灭基团（blackholequencher-1）

FAM：6-羧基荧光素（

6-carboxyfluorescein）

PBS：磷酸盐缓冲盐溶液（phosphatebufferedsaline）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscriptpolymerasechainreaction）

5原理

DropletDigitalPCR，ddPCR）的技术原理是利用微滴化技术将一份反应体系

微滴式数字PCR（

分成数万个纳升级的微滴进行定量PCR检测，本质上是将传统定量PCR的一次检测变成数万次检测，

提高了检测的灵敏度和精准度。微滴发生器可以将每一份扩增体系分成数万个均匀的纳升级微滴，

每个微滴不含或者含有一个至数个待检核酸靶分子。每个微滴都将作为一个独立的PCR扩增体系，

在PCR扩增仪上进行终点PCR扩增。利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴

判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0。然后根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，计算出待检

靶分子的浓度或拷贝数。

6试剂与材料