仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价课件.pptVIP

仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*3、杂质检查常见方法介绍HPLC法－考虑被仿制药的色谱条件－考察同类物质质量标准中的杂质检查方法－一般选择多种色谱条件：正相和反相－方法包括：固定相、流动相、洗脱方式、波长、测试样品的处理、具体操作、计算方法二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*3、杂质检查常见方法介绍（1）固定相的选择－根据特征研究的药物的特性选择合适填料的柱子。常用RP-HPLC，色谱柱多选C18柱、C8柱、苯基柱、氨基柱也有使用－C18柱时，流动相有机溶剂％通常≥5％－流动相的pH值2～8－pH8，溶解硅胶载体，宜选用耐碱填充剂，包覆聚合物、高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、非硅胶或有机-无机杂化填充剂－pH2，键合相水解脱落，宜选用耐酸性填充剂：有机-无机杂化填充剂、具有大体积侧链的二异丙基或二异丁基取代C18键合硅胶等二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*3、杂质检查常见方法介绍（1）固定相的选择－注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究：a、当杂质峰与主峰的分离情况不十分完美b、确定辅料峰的相对保留时间（用于定位扣除辅料的干扰）c、确定特定杂质的相对保留时间d、确定有关物质出峰完毕的保留时间－－当不同品牌而引起以上各因素不固定时，应在标准中注明品牌二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*3、杂质检查常见方法介绍（2）流动相的选择?尝试多种流动相?结合杂质的性质－手性杂质－无紫外吸收杂质－一般杂质（3）洗脱方式的选择等度洗脱梯度洗脱极性大的化合物可能被掩盖，极性小的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上，可使用梯度洗脱法二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*3、杂质检查常见方法介绍（4）波长的选择－选择的原则是大部分主要杂质与主成分均在此波长下有吸收：二极管阵列法－无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种化合物，有时在单一检测波长处不能检出－兼顾各杂质吸收情况：特定波长检测特定杂质－必要时，该用其它类型的检测器二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*3、杂质检查常见方法介绍（5）样品的处理和配制－预处理样品考虑乳膏提取可能导致的杂质漏检和失真衍生化处理导致杂质丢失－样品浓度的影响浓度高利于杂质检出，但防超载低浓度样品杂质的检查难题？二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*3、杂质检查常见方法介绍（6）杂质的定量计算方法－杂质对照品法：定量准确，已知杂质，需用杂质对照品－校正因子的主成分自身对照法：定量准确，已知杂质，无需长期提供杂质对照品－不加校正因子的主成分自身对照法：前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同，有一定的误差，可用于未知杂质，已知杂质对主成分的响应因子在0.9～1.1之间－峰面积归一化法：简便，因杂质与主成分响应因子不同，线性范围不同、仪器对他们的积分精度及准确度不同等因素，有一定的局限性二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*目前定量方法中存在的主要问题－杂质对照品法：使用较少－主成分自身对照法：较少采用校正因子计算（杂质无法进行归属或杂质对照品无法得到，校正因子无法计算）－常见的是对未知杂质，不加校正因子的主成分自身对照或面积归一化法（无法准确定量，无法有效检测杂质）TLC法－设备和操作简便，一些特定杂质的检查－灵敏度较差、定量不够精确，分离度欠佳，有时无法满足需要－仅限于限度检查（半定量），结合不同原理的检视技术能使各杂质斑点均可显示，弥补HPLC的不足。－需做好系统实用性试验二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*定量方法－限度检查（半定量）－对照品比较法：已知杂质，对照品－自身对照法：已知杂质、未知杂质、色调一致－检视技术：显色、荧光、自身颜色LC-MS、GC-MS、GC-IR、CE-MS法－分离技术和鉴别技术联用，为解析化合物的结构提供直接证据－有助于杂质谱的分析和定性二、杂质检查方法的建立仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价*方法验证的目的考察分析方法十分适用于杂质的检测和定量方法验证中面临的困难杂质谱不清杂质对照品无法获取验证的具体要求三、杂质检查方法学验证的要求仿制药杂质检查方法