《微生物的实验室培养》教案.docVIP

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课题1微生物的实验室培养

【课题目标】

1.通过阅读教材，结合观看培养基相关素材，认识有关培养基的基础知识。

2.通过观看无菌操作视频，结合教师详细讲解，能够掌握无菌操作技术。

3.通过观看实验视频，结合实际实验操作，能够完成纯化大肠杆菌的操作。

【课题重点】

无菌技术的操作

【课题难点】

无菌技术的操作

【教学方法】

启发式教学

【教学工具】

多媒体课件

【教学过程】

（一）引入新课

在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。

（二）进行新课

1.基础知识

1.1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。

〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。

【补充】培养基的类型及其应用：

标准

培养基类型

配制特点

主要应用

物理性质

固体培养基

加入琼脂较多

菌种分离，鉴定，计数

半固体培养基

加入琼脂较少

菌种保存

液体培养基

不加入琼脂

工业生产，连续培养

化学组成

合成培养基

由已知成分配制而成，培养基成分明确

菌种分类、鉴定

天然培养基

由天然成分配制而成，培养基成分不明确

工业生，产降低成本

目的用途

鉴别培养基

添加某种指示剂或化学药剂

菌种的鉴别

选择培养基

添加（或缺少）某种化学成分

菌种的分离

1.2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。

〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？

C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。

【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。

氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。

1.3培养基除满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。

【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。

〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。

〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。

活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：

1.4获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

1.5无菌技术包括：

（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；

（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；

（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；

（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

1.6比较消毒和灭菌（填表）

比较项

理化因素的作用强度

消灭微生物的数量

芽孢和孢子能否被消灭

消毒

较为温和

部分生活状态的微生物

不能

灭菌

强烈

全部微生物

能

〖思考5〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者。

1.7消毒方法：

（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；

（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；

（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。

（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；

（5）饮水水源用氯气进行消毒。

1.8灭菌方法：

（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；

（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；

（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。

〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。

〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至100kPa，温度为121℃，并维持15～30min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸。

【补充】培养基的配制原则：

①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基