T_BPMA 25-2024 人体粪便样本中溶藻弧菌检测.docx

ICS11.100CCSC05

BPMA

北京预防医学会团体标准

T/BPMA25—2024

人体粪便样本中溶藻弧菌检测

DetectionofVibrioalginolyticusinhumanfecalsamples

2024-04-23发布2024-04-23实施

北京预防医学会发布

T/BPMA25—2024

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由北京市通州区疾病预防控制中心提出。

本文件由北京预防医学会归口。

本文件起草单位：北京市通州区疾病预防控制中心、北京市疾病预防控制中心、北京市顺义区疾病预防控制中心。

本文件主要起草人：赵凤玲、张晓嫒、李颖、王迪、王建国、高翔、邹林、常馨、刘扬、崔玉娟、李晓辉、王艳春、李秋虹、赵春艳、邵春昕、罗宇馨、黄震、王润萍、甄博珺、张萍、张冲、高洁、周景林、王苗、张莹。

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人体粪便样本中溶藻弧菌检测

1范围

本文件描述了人体粪便样本中溶藻弧菌的检测方法。本文件适用于人体粪便样本中溶藻弧菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4设备和材料

4.1恒温培养箱：36℃±1℃。

4.2恒温水浴箱：50℃±1℃。

4.3全自动微生物生化鉴定系统。

4.4实时荧光PCR仪。

4.5基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪：微生物指纹图谱数据库中应包括溶藻弧菌等常见致病性弧菌。

4.6低温高速离心机：转速≥12000r/min。

4.7恒温水浴锅或金属浴：可控温100℃。

4.8微量移液器及带滤芯吸头：0.1μL～2μL、2μL～10μL、10μL～20μL、20μL～200μL、100μL～1000μL。

4.9无核酸酶PCR管、离心管。

4.10无菌接种环：10μL、1μL。

4.11无菌培养皿：直径90mm。

4.12无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm。4.13无菌锥形瓶：容量500mL、1000mL。

4.14漩涡混匀器。

4.15一次性或重复使用靶板。4.16显微镜。

5培养基和试剂

实验用水应符合GB/T6682三级水的要求

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5.1Cary-Blair运送培养基：符合附录A中A.1的规定。

5.23%氯化钠碱性蛋白胨水：符合附录A中A.2的规定。

5.3硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂：符合附录A中A.3的规定。

5.4弧菌显色培养基。

5.53%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂：符合附录A中A.4的规定。

5.6革兰氏染色液：符合附录A中A.5的规定。

5.7氧化酶试剂：符合附录A中A.6的规定。

5.83%氯化钠三糖铁琼脂：符合附录A中A.7的规定。

5.9嗜盐性试验培养基：符合附录A中A.8的规定。

5.103％氯化钠甘露醇试验培养基：符合附录A中A.9的规定。

5.113％氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基：符合附录A中A.10的规定。

5.123％氯化钠Voges-Proskauer（V-P）培养基：符合附录A中A.11的规定。

5.13V-P试剂：符合附录A中A.12的规定。

5.14ONPG试剂：符合附录A中A.13的规定。

5.15生化鉴定试剂盒。

5.16细菌DNA提取试剂盒。

5.17荧光PCR反应配套试剂：2×PremixExTaqTM、灭菌去离子水、引物、探针，或商品化溶藻弧菌荧光PCR检测试剂盒。

5.18α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA）基质溶液：符合附录A中A.14的规定。

6操作步骤

6.1样本的收集

采集新鲜粪便样本2个黄豆至蚕豆大小,水样便采集大约2mL～5mL。所采集的粪便样本2h