妊娠期低剂量镉染毒对F1和F2代性别比影响.docx

妊娠期低剂量镉染毒对F1和F2代性别比影响

前言

镉作为一种重要环境污染物可以对人体和动物产生多种方面的毒性。近年来由环境因素导致生育水平的下降日益引人关注，镉作为其中重要的环境污染物质能以多种方式干扰生殖系统及后代健康，流行病学表明，镉暴露可引起男性生育功能下降，甚至不育REF_Ref1837\r\h错误!未找到引用源。，实验室研究表明镉可以通过不同途径和方式干扰雄性生殖系统，包括睾丸、类固醇激素、酶的水平以及内分泌活动等REF_Ref1895\r\h错误!未找到引用源。，动物实验研究发现，镉通过影响雄性激素的释放，降低睾酮（T）水平，从而影响生殖能力REF_Ref1837\r\h错误!未找到引用源。，妊娠期的镉暴露还可导致雄性后代生精上皮周期异常，表现为第VII阶段的显著增加和第VIII阶段的减少REF_Ref1993\r\h错误!未找到引用源。，可能是妊娠期的特殊生理状况使镉的吸收量增加，从而对子代产生毒性作用，不仅影响下一代人口数量，还可能降低下一代的人口质量。镉对生殖系统的主要毒性是对睾丸的作用，由于睾丸组织MT合成较其他器官少，对镉的作用敏感，是镉毒性作用的重要靶器官。镉通过诱导睾丸、附睾等雄性生殖器官发生结构和功能上的退行性变化，引起生殖障碍、精子改变，甚至不育REF_Ref2039\r\h错误!未找到引用源。。在用氯化镉对大鼠染毒的实验研究中，发现对睾丸组织病理学及超微结构有明显的损害作用，随着镉染毒剂量的增加，睾丸曲细精管内生精细胞层逐渐减少REF_Ref2085\r\h错误!未找到引用源。，生精上皮细胞与基膜之间存在间隙REF_Ref1837\r\h错误!未找到引用源。精原细胞及精母细胞发生变性、坏死和脱落，进一步堵塞管腔，睾丸间质细胞变性坏死，出现玻璃样变性。支持细胞出现空泡，超微结构改变，表现为线粒体肿胀，嵴溶解、断裂，溶酶体增多，内质网扩张，核染色质异常凝聚，核碎裂等。小鼠精母细胞呈现出线粒体空泡、核膜内陷、染色质周缘化及核固缩等形态特征REF_Ref2225\r\h错误!未找到引用源。。由于睾丸的主要功能是合成精子和雄性激素，而睾丸内曲细精管是由生精细胞和支持细胞组成的，曲细精管间分布的是间质细胞，合成雄性激素REF_Ref2278\r\h错误!未找到引用源。，因此镉致上述睾丸的组成结构发生病理改变为生殖功能的改变，以及导致子代不良出生结局提供了病理基础。

相关流行病学表明，妊娠期镉暴露对子代的生长发育有一定影响，包括低出生体重，以及体重在不同性别中的差异[8]。为了探究妊娠期镉暴露对F1代甚至F2代的体重和性别的影响，以及对F1和F2代间的差异而设计本实验，从这一角度探究镉对后代的毒性作用。

1实验试剂

由氯化镉（CdCl2）粉末和蒸馏水配制成0.15mg/ml，0.3mg/ml，0.6mg/ml的溶液备用染毒，0.9%氯化钠（NaCl）水溶液作为对照组灌胃溶液。

2实验动物

由福建医科大学动物实验中心提供SPF级成年SD大鼠雌鼠、雄鼠，体重250±10g。合同编号2018-12DM093，饲养温度20±2℃，湿度70%±10%，垫料高压灭菌消毒，饲料统一动物中心提供，孕期提供妊娠专用饲料，自由饮水进食。

3实验方法

3.1实验动物分组和染毒

SPF级SD成年大鼠雌雄2：1合笼，第二天检查阴栓和阴道涂片，检出阴栓、阴道涂片看到精子时认为受孕，当天记为妊娠第0天（GD0）。将40只雌性大鼠随机分为四组，以0.5、1、2mg/kg/d剂量灌胃染毒，对照组给予生理盐水，1ml/300g，直至妊娠期（21天）结束。若21天后还未生产，灌胃21天后结束,不再实施灌胃操作。此期间大鼠记作F0代，生产后小鼠记作F1代；F1代大鼠各剂量组随机选取雄鼠进行繁殖，雄鼠养至成年后（56日龄），与外来未受处理的成年SD雌鼠1:2进行合笼。生下后小鼠记作F2代。

技术路线图：

SPF级SD成年大鼠雌雄2：1合笼受孕

↓

F0代：将40只受孕雌性大鼠随机分为4组灌胃染毒，连续21d

（1次/d，1ml/300g）

（对照组：0.9%NaCl2溶液、

低剂量组：0.5mg/kgCdCl2溶液、

中剂量组：1mg/kgCdCl2溶液、

高剂量组：2mg/kgCdCl2溶液）

↓

F1代：产出F1大鼠，正常饲养，记录每窝雌雄个数和体重