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人单纯疱疹病毒抗体（HSVAb）试剂盒实验原理

人单纯疱疹病毒抗体(HSVAb)试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法

测定标本中牛I型胶原蛋白(ColI)水平。用纯化的牛I型胶原蛋白(ColI)抗体包

被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入I型胶原蛋白(Col

I)，再与HRP标记的I型胶原蛋白(ColI)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复

合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝

色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的I型胶原蛋白

(ColI)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲

线计算样品中牛I型胶原蛋白(ColI)浓度。

 标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽

快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻

融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活

性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下

列图表在小试管中进行稀释。

 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相

同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50mu;l，待测样

品孔中先加样品稀释液40mu;l，然后再加待测样品10mu;l（样品最终稀释

度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤

液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每

孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶

标试剂50mu;l，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显

色：每孔先加入显色剂A50mu;l，再加入显色剂B50mu;l，轻轻震荡混匀，

37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50mu;l，终止反应（此时蓝色

立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD

值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。人单纯疱疹病毒抗体(HSVAb)

试剂盒操作程序总结：

 计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲

线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标

准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入

方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。牛I型

原蛋白(ColI)酶联免疫分析试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在

室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密

封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，

洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以

避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪

加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过

高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍

数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（乘以n乘以5）。5．封

板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说

明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液

和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。人单纯

疱疹病毒抗体(HSVAb)试剂盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

 tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。仅供参阅！