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内毒素定量检测方案探索

近几十年，人们对疾病病因、病理的认识不断深化，发现了许多疾病与内毒

素的关系。由于很小剂量的内毒素即能引起极广泛的生物作用及病理作用，因而

加强内毒素的检测研究便成为临床、公卫及药检等领域的重要课题。

细菌内毒素定量检查在国内外已经普遍用于注射剂生产过程的质量控制和

终产品的质量检测，生物制剂中间过程也必须采用细菌内毒素检查法，以确保制

剂安全性。细菌内毒素定量检查法在医药卫生、食品卫生、环境卫生、分子生物

学以及微生物学等领域均有广泛应用。自中国药典收录细菌内毒素定量检测方法

以来，很多人运用此方法对中药注射剂进行了细菌内毒素的检测。由于内毒素与

鲎试剂的反应属于一种生化反应，而生化反应可能受到酶、环境等各种因素的干

扰，所以在测定中存在着多种因素对实验的结果有着不同程度的影响。

细菌内毒素检查法又称鲎试验法，它是1964年由美国学者Levih和Bang

发现，并在1968年正式建立的一种定性或定量检测微量细菌内毒素的分析方法。

该法具有灵敏度高、特异性强和操作简便快捷的特点，不仅在药学，而且在微生

物学及临床检验等领域应用较为广泛。1973年，美国食品药品管理局承认鲎制

剂是一种生物制剂。1980年，美国药典首先收载此法，其后英、德、意、日等

国相继收载了这一检查方法。1983年我国卫生部授权中国药品生物制品检定所

组织全国范围的大输液及放射性药品鲎试验检查方法。1995年，中国药典收载

了修订后的细菌内毒素检查法，并取消了原热原检查。2003年，对细菌内毒素

定量检测开始在我国临床全面开展应用。

鲎试验法可广泛用于革兰氏阴性菌感染的快速诊断，可对患者的血液、尿液

及脑脊液进行直接检查，有助临床医生及时发现内毒素疾病，以迅速采取果断的

治疗。在公共卫生方面，鲎试验法可对水源、食物、饮料等进行内毒素测定，以

便将其控制在规定水平以下，预防疾病，保障人民健康。用此法检测药品和生物

制品等开展较早，如美国收载检测品种已上升为600多个。而且，国外用此法检

测医疗用具中内毒素污染含量的研究进行的比较深入。

据有关资料，正常人血中内毒素浓度为：＜0.1EU／ml，超过此值即可诊断

为内毒素血症。许多研究表明，内毒素与多种疾病密切相关，内毒素血症多随病

情恶化而加重，随病情缓解而减轻。因此，内毒素可以作为一个衡量病情和判断

预后的参考指标。也可用于临床治疗及判定疗效或筛选恰当药物的指标之一。细

菌内毒素，英文称作Endotoxin，是革兰氏阴性菌（G-菌）细胞壁上的一种脂多

糖（LipoplySaccharide）和微量蛋白（Protein）的复合物。内毒素为外源性

致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调

节中枢引起发热。细菌内毒素的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死

亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。细菌内毒素这个概念

在1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引起的，1933年

Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到1940年

时候，Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部

分所组成的复合体，到了1950年以后，随着生物学，物理化学，免疫学以及遗

传学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物

活性间的关系也更加明确起来。

细菌英文叫Bacteria：为原核生物中的一类单细胞微生物由二分裂法繁殖。

若按革兰氏染色法可将细菌分为G+菌和G-菌两大类。这两类细菌细胞壁的结构

和化学组成存在很大差异。唯有肽聚糖为其共同成分，但其含量的多少和肽链的

性质有所不同，细菌内毒素的化学成分广泛分布于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、

布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、沙门氏菌等）及其它微生物（如衣原体、立克

次氏体、螺旋体等）的细胞壁层的脂多糖，其化学成份主要是由O-特异性链、

核心多糖、类脂A三部分组成。

1O-特异性链

位于脂多糖分子最外层的多糖链，是由3-5个单糖（一般不多于25个）连

成为一个多糖链。其单糖包括戊糖、氨基戊糖、已糖、氨基已糖、脱氧已糖等，

单糖的种类、位置和排列顺序和空间构型，因菌种不同而异。因此，它决定菌体

热原的特异性。

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