《医学免疫学与生物学》革兰染色.pptx

革兰染色[目的]：掌握革兰染色法的操作及结果的判断,熟悉其原理。

[原理]：主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大，通透性低，脂质少或无，酒精作用使孔径缩小；而G-肽聚糖为二维疏松结构，薄，外膜含大量脂质，易被酒精溶解，使细胞壁通透性增高，结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。

[步骤]：1.细菌标本的制作（1）涂片：无菌操作。取一接种环混合细菌悬液，涂布成直径约1cm的涂片，涂片应薄而均匀。（2）干燥：涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上，放在酒精灯上方微火处干燥。（3）固定：标本面向上，在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次，放置待冷后染色。固定的目的是杀死细菌，使细菌与玻片黏附较牢固。菌体蛋白质变性后，提高与染料的亲和力。

2.革兰染色（1）初染：滴加结晶紫染液1-2滴于涂片上，1分钟后用自来水缓缓冲洗。（2）媒染：滴加碘液1-2滴，1分钟后用自来水缓缓冲洗。（3）脱色：加95%酒精数滴，摆动玻片使酒精与细菌充分接触，约20-30秒后，立即用自来水缓缓冲洗。（4）复染：滴加稀释碳酸品红液，30-60秒后，自来水缓缓冲洗。用吸水纸吸干后，用油镜观察。

[结果]：染成紫色者为革兰阳性菌，染成红色者为革兰阴性菌。[注意事项]1.涂片时注意无菌操作,防止污染。2.酒精脱色时，要充分晃动。3.用吸水纸吸水时，放在桌面上操作。4.镜检后，将玻片放入消毒缸。

细菌形态和特殊结构的观察

示教：革兰阳性菌：葡萄球菌，紫色革兰阴性菌：大肠杆菌，红色鞭毛芽胞荚膜

三、细菌形态和特殊结构的观察

示教：革兰阳性菌：葡萄球菌，紫色革兰阴性菌：大肠杆菌，红色鞭毛芽胞荚膜