《医学免疫学与生物学》ELISA酶联免疫吸附实验.pptx

酶联免疫吸附实验

ELISA双抗体夹心法测HBsAg

[目的]：掌握酶联免疫吸附实验的原理，熟悉其操作方法。

[原理]：将酶与抗体（或抗原）用交联剂结合起来，此种酶结合物能与相应的抗原（或抗体）发生特异性结合反应，形成酶-抗原抗体大分子复合物，此时再加入酶底物，底物被酶催化生成有色产物，最后借助反应体系的颜色变化及呈色深浅来推断样品中检测对象的有无或含量。

[二]操作方法：1．加待检患者血清：0.05ml/孔，并设HBsAg阳性对照2孔，HBsAg阴性对照2孔，空白对照1孔。2．加HBs－HRP：0.05ml/孔，空白对照不加，充分混匀，置37℃30min。3．洗板：弃去反应板孔内液体，拍干；用洗涤液注满各孔，静置5－10sec，弃去孔内洗涤液，拍干，如此反复5次，拍干。

4．加显色剂：先加显色剂A，0.05ml/孔；再加显色剂B，0.05ml/孔；充分混匀，置37℃避光15min。5．终止反应：每孔加终止液0.05ml/孔，混匀。6．测定：1）目测法：与阳性和阴性对照比较，观察颜色深浅作出判断2）用酶标仪读取各孔OD值。

[注意事项]1．封闭时注意将封闭液加满各反应孔，并去除各孔中可能产生的贴孔壁气泡。2．加洗涤液时，每孔加满，但不要溢出3．每次洗涤液在孔中的停留时间不应少于1分钟4．洗涤后板要甩干，不要残留液体。