鸡骨胶原蛋白的酶解及其工艺优化.docx

题目：鸡骨胶原蛋白的酶解及其工艺优化

摘要

【研究目的】为探究鸡骨胶原蛋白酶解为多肽的最佳酶制剂及工艺，【方法】以蛋白水解率为指标，首先进行筛酶实验，并以最佳结果作为水解酶进行四因素五水平单因素试验，采用Box-Behnken实验原理设计实验方案，进一步确定酶解最佳时间、温度、pH及料液比条件，并进行验证。【结果】单因素结果显示，酶法制备鸡骨胶原蛋白肽的最佳酶制剂为木瓜蛋白酶，酶解条件为酶解温度60℃，酶解时间4h，料液比40:1，pH为7；【结论】经响应曲面法优化后的最佳工艺为：控制酶解时间酶解温度63℃、酶解时间4.9h、料液比40:1、pH值7.2，在该最佳组合条件下,鸡骨胶原蛋白肽有最大水解度，为11.96%。

关键词：本科生；毕业论文（设计）；酶解；鸡骨；胶原蛋白；响应面设计

鸡骨中胶原蛋白的酶解及其工艺优化

1引言

禽类鸡以其蛋白质含量高，脂肪含量低的特点受到各类人群的喜爱，因而在我国的消费量巨大。其中不能食用的鸡骨部分约占整鸡总重量的四分之以一。目前存在于市面上的对鸡肉的各种精深加工，如：即食鸡胸肉、鸡肉肠和鸡肉丸等会导致鸡骨资源未被较好利用就大量浪费。鸡骨虽不能直接被人食用，但打碎处理后可提取出各类人体所需的重要营养物质，除了水分以外，蛋白质含量最为丰富，骨蛋白90％以上由胶原蛋白组成[1]，这种胶原蛋白加热后更易溶解出被人体消化分解，生长速度慢、成年及老化动物的胶原蛋白在加热后溶出率较低。一只鸡从胚胎形态生长为可食用时期一般需要60天左右，与其他可食用动物的生长期相比较短，显然，从鸡骨中的提取胶原蛋白具有卓越性和持续操作性。

胶原蛋白在人体各个器官和各项生理活动中起重要作用，是哺乳动物体内最为丰富的蛋白质，在支撑器官和减少肌体损伤有卓越贡献。人体皮肤中，胶原蛋白含量极高，它对改善人体皮肤光泽、淡化皮肤皱纹和减少水分流失而言至关重要。研究显示，骨胶原蛋白具有独特的三股超螺旋结构[3]，这种特殊构造使其难以被分解为下一级小分子产物，导致进入人体的骨胶原蛋白难以被消化吸收，造成营养浪费。将鸡骨胶原蛋白降解成为低分子形态是解决目前鸡骨资源浪费大的有效手段，也是未来禽类骨资源加工利用的发展方向。近年来海内外学者的研究纷纷证实，胶原蛋白在延缓人体衰老和防止老年慢性病方面有重要意义，而蛋白肽是蛋白质的小分子降解产物，由氨基酸组成

[4]，比起蛋白质，胶原蛋白肽具有更多优良特性，如抗氧化、降血压、抗菌、降血糖、促进皮肤胶原代谢等[5][6]

[7][8][9]10]。我们应该敏锐地意识到，鸡骨蛋白酶解后的产物将会大大减少鸡骨资源的浪费，并且会为我们提供更多结构新颖、功能特别的活性物质。

近几年我国对于禽类副产品（皮、骨）尤其是鸡骨中胶原蛋白肽的研究较少,仅有在小鼠上研究鸡骨胶原蛋白肽对半乳糖的抗氧化性的研究[11]和单一蛋白肽抗氧化性的研究[12]。针对肽的制备方法上，仅符群[13]等研发了酶法提取鸭皮胶原蛋白的工艺和技术。

本实验将对已经经过加工的鸡骨胶原蛋白粉进行初步降解，由于蛋白质在极端条件下会解旋断链，实验将采取最温和的酶解法，参考郭德斌[14]等鸭皮胶原蛋白肽的制备方法，首先以未知蛋白含量鸡骨蛋白粉为原料，选取四种实验常用酶制剂（胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶），依照酶对应的条件，以蛋白质酶解程度为指标，筛选出效果最好的酶制剂。以时间、温度、料液比和pH为因素,进行单因素试验，在确定最佳提取工艺的基础上，采用Box-Behnken实验原理响应面实验方案[15]，当预测响应值（水解度）最大时，对其预测的水平组合进行验证实验。

通过这次实验,目的在于优化酶解鸡骨胶原蛋白的酶解工艺，使其转化为小分子肽，拓宽应用范围和人体吸收率，增大鸡骨副产品的利用率，减小浪费。此优化后工艺也可推广至其他畜禽副产品中胶原蛋白肽的提取，使副产品价值最大化，提高经济效益。

材料与方法

试验时间地点本研究试验于2020年在云南农业大学畜产中心实验室进行。

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试验材料

原料未知蛋白含量的鸡骨胶原蛋白粉

主要试剂及仪器

表1主要试剂表

Table1Mainreagentslist

试剂名称

试剂规格

生产厂家

碱性蛋白酶

500g

源叶生物科技有限公司

胃蛋白酶（猪胃粘膜）

500g

源叶生物科技有限公司

胰蛋白酶（牛胰）

500g

源叶生物科技有限公司

木瓜蛋白酶

500g

南宁庞博生物工程有限公司

盐酸

500ml

重庆川东化工有限公司

甲醛

500l

重庆茂业化学试剂有限公司

氢氧化钠

100g

西泷科学股份有限公司

表2主要仪器表

Table2Mainunstrumentslist

仪器名称

型号

生产厂家

电热恒温水浴锅