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临床肺科杂志2009年3月第14卷第3期353

分枝杆菌鉴定的分子生物学方法研究进展

王亚娟冯萍熊礼宽

分枝杆菌属包括结核分枝杆菌群(mycobacteriumtubercu-可鉴别BCG与MTC的其他菌株。IS1245几乎仅存在鸟分枝

losiscomplex，MTC)、麻风分枝杆菌及非结核分枝杆菌(nontu—杆菌中，具有多拷贝(3～27个，平均为16个)。IS900仅存在

berculosismycobacteria，NTM)。自1882年Koch发现结核菌于鸟分枝杆菌亚种副结核分枝杆菌(MAP)中，其为靶基因可

以来，已报道了100余种分枝杆菌，其中约30种与不同的人鉴定MAP。而ISMpal也几乎仅存在于MAP，联合IS900可

类或动物疾病有关。其中结核分枝杆菌(MTB)是最常见且使鉴定更具特异性。IS2404为溃疡分枝杆菌特有，而IS2606

最重要的致病菌，世界卫生组织2008年全球结核控制报告显属溃疡分枝杆菌和My．Lentiflavum特有，以此可鉴别海分

示，2006年患病例数约1440万，新发病例估计有920万，比上枝杆菌和溃疡分枝杆菌。

年增加约10万，而死于结核的患者估计有170万。3蛋白编码的基因分枝杆菌共有：65KD热休克蛋白

致病性的NTM随着AIDS在全球迅速蔓延也更为多见，基因(hsp65)、32KD蛋白基因、DnaJ蛋白基因、RNA聚合酶B

同时陆续发现之前认为不致病的田鼠分枝杆菌可导致败血亚单位基因(rpoB)、DNA解旋酶基因(gyrB和gyrA)等。

症，新金色分枝杆菌引起肺部感染…，嗜血分枝杆菌引发眼部分分枝杆菌特有：MPB64蛋白基因(mpb64)MTC所特

内炎等。有，38KD蛋白抗原基因仅存于人型和牛型结核分枝杆菌，

不同分枝杆菌感染的症状、体征及影像学检查并无特异MTP40蛋白基因(mtp40)几乎只存在于人型结核分枝杆菌，

性，而各自的治疗方案却差异较大。准确地鉴定分枝杆菌属，MPB70蛋白基因(mpb70)是牛型结核分枝杆菌所特有的，组

并进一步鉴定到种甚至亚种，同时进行耐药性检测，不仅对于蛋白样蛋白编码基因(hupB)也几乎只存在于牛分枝杆菌中。

流行病学研究，且对于临床诊断和治疗都具有重要意义。4其他编码延伸因子Tu的基因(tuf)和编码转运

目前常用的鉴定方法有传统的涂片、培养、生化试验及现mRNA的基因(ssrA)也可用于分枝杆菌鉴定。也有报道分

代分子生物学技术。而传统方法耗时(对于慢生长分枝杆菌泌相关蛋白基因(secA1)作为靶基因可鉴定29种分枝杆菌，

培养需4～8周)，费事(生化试验种类繁多)，不经济(所需试且可鉴别海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌。但仍不能鉴别出

剂有些价格较高)，且有时结果很难判断(需要有经验的专MTC各成员。

家)。分子生物学方法中特别是核酸相关鉴定技术快速、敏二、以PCR为基础的分子生物学技术

感且特异，具有较大的临床应用潜力，现综述如下：1单纯采用PCR技术

一、鉴定主要涉及的基因(1)PCR：选用一对特异性引物扩增，通过检测扩增后的

1、rRNA基因此序列高度保守，现应用较为广泛，其碱目的片段来鉴别菌种。一般仅能将细菌鉴别到属或群，对种

基5000万年变化1％。主要包括23S、16S及5S基因。的鉴别意义不大，临床上多采用实时荧光定量PCR进行MTC

(1)16SrRNA基因在rRNA基因中，因其长度合适，既的检测。

有高度保守的属特异性序列又有可变的种特异性序列，常用(2)多重PCR(mutip