实验四动物血液基因组DNA的提取.ppt

动物基因组DNA的提取常祖明背景知识动物细胞中有哪些细胞器中含有DNA？与植物细胞的差别？DNA的存在形式背景知识DNA的存在形式背景知识DNA的存在形式背景知识背景知识DNA的存在形式1核苷酸2四级机构-染色体3+组蛋白4双螺旋结构一级结构-核小体二级机构-螺线管三级结构-超螺旋管5231DNA为白色类似石棉样的纤维状物，大都呈酸味。DNA是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。在酸性溶液中，易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。DNA的理化性质掌握CTAB法提取植物DNA的原理掌握CTAB法提取植物DNA的实验方法注意：此方法会把少量RNA提取出来，故后面通称核酸的提取。实验目的哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济。用鸡血细胞做实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。实验原理血样采集洗涤去杂质固定沉淀DNA0102裂解细胞蛋白质降解抗凝血蛋白质变性0304实验原理普通家鸡无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、尿素、十二烷基硫酸钠(SDS)、1MTris-HCl(PH8.0)缓冲液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿(三氯甲烷)、异戊醇 实验材料实验仪器取血针及管离心机：3台/12管离心管：水浴锅：65℃移液枪（包括枪头）TE缓冲液PH8.050ml酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）共需60ml，每管2ml氯仿-异戊醇（24:1）共需54ml，每管1.8ml禽血裂解液100ml（共需51ml，每管1.7ml）ACD抗凝剂100ml（共需48ml，每管0.8ml）75%的乙醇实验试剂实验步骤弃上清液取680ul800ulACD抗凝剂翅下取血5ml75%乙醇20ml5ml离心管弃上清液1700ul裂解液10ul蛋白酶K800ulACD抗凝剂实验步骤2ml饱和酚摇匀至无块状DNA酚蛋白层5ml离心管取上层透明的DNA溶液2ml酚-氯仿-异戊醇5ml离心管取上层DNA液1.8ml氯仿-异戊醇5ml离心管取上层DNA液无水乙醇75%无水乙醇1000ulTE缓冲液晾干-20℃保存