真核生物基因表达的调控 (2).ppt

12.7.2.4mRNA非编码区对翻译的影响1988年Pelletier和Sonenberg发现，在一个人工的双顺反子mRNA两个编码区域中插入脊髓灰质炎病毒(poliovirus，Pv）的5-UTR序列能有效地引导第二个顺反子的翻译。这表明该病毒非帽端结构的5-UTR能指导mRNA的蛋白合成，但并不依赖于上游开放阅读框架的表达。这种非依赖帽端结构的蛋白合成的模式，被称为内部起始模型。它指的是核糖体结合到mRNA的内部区域，即直接结合到AUG或其上游的翻译起始表达过程，是针对多顺反子mRNA扫描模型的重要补充。在此机制中，与核糖体相结合的5-UTR序列被称为内部的核糖体进入位点（internalribosomeentrysite,IREs)。第128页,共156页，星期六，2024年，5月5-UTR序列一般位于5-帽端结构后，其互补序列可形成稳定的茎环二级结构，阻止核糖体40S亚基的迁移，抑制核糖体预起始复合物沿着mRNA的运动，干扰起始复合物的扫描，作用的强弱则取决于发夹结构的稳定性及其在5-UTR中的位置。铁离子应答元件(IronResponsiveElements，IREs)是一个在近帽子区域由28个核苷酸组成的茎环状顺式元件，在铁离子缺乏时，与反式作用因子铁阻遏蛋白(IRP)结合，使核糖体进程受阻，抵制其mRNA的翻译。而铁离子浓度较高时，IRP则释放IRE，促进翻译。5-帽子近端的IRE/IRP复合物在空间上形成障碍，调节着翻译的起始。在哺乳动物细胞中发现，IRE必须位于5-末端的40个核苷酸位置内。如果在帽子结构较远端，则由IRE/IRP亲和性产生的对翻译的调节不论在体内还在体外均会被削弱。近帽子区域内的茎环结构比位于离AUG较近的茎环结构有更强的抑制作用，这可能主要与扫描所需要的从ATP水解获得的热动力驱动相关。第129页,共156页，星期六，2024年，5月5-端非翻译区的长度也会影响到翻译的效率和起始的精确性。当该区长度在17～80nt之间时，体外翻译效率与其长度成正比，该区域高极结构和高的G-C含量对翻译的起始都有妨碍。5-端非翻译区的二极结构妨碍调控蛋白与帽子结构的接近，阻碍40S前起始复合体的装配和在mRNA上的扫描，起负调控的作用。但若二级结构位于AUG的近下游（最佳距离为14nt），将会使移动的40S亚基停靠在AUG位点，增强起始反应。真核翻译起始因子可使其二级结构解链，使翻译复合体顺利通过原二级结构区，继续其肽链的延伸，而不会起阻碍作用。起始密码子AUG的位置和其侧翼的序列对翻译的效率也有影响，这些因素主要是通过改变与调控蛋白、核糖体、RNA等的亲和性而影响起始复合物的形成，以致影响到翻译的效率。如AUG上游－3位为A和下游+4位必须是G才能进行有效翻译，这一规律对动物和植物都是适用的。侧翼序列之间的差异会影响mRNA翻译的效率，这对从多个上游AUG中寻找和确定起始密码子具有指导意义。真核生物mRNA上通常有多个AUG，核糖体小亚基必须能够正确识别，一旦识别错误，干扰正常AUG启动的翻译，使翻译维持在较低水平。如肿瘤生长因子TGFβ的mRNA的5-非翻译区有11个AUG，核糖体与这些上游AUG结合，对TGFβ的翻译起负调控的作用。第130页,共156页，星期六，2024年，5月mRNA3-端的poly(A)不仅和mRNA穿越核膜的能力有关，而且影响到mRNA的稳定性和翻译效率，PolyA长度和翻译效率有关。有人将poly(A)比做翻译的计数器，随着翻译次数的增加，poly(A)会逐步缩短。Poly(A)对翻译的促进作用需要poly(A)结合蛋白（PABP）的存在，PAPB结合poly(A)的最短长度为12nt。当poly(A)缺乏PAPB的结合时，裸露的mRNA3-端易招致降解。PAPB迁移到AU序列时，导致poly(A)的暴露促进了mRNA的降解。帽子结构和Poly(A）都能通过与它们的共同靶蛋白eIF-4G相互作用，使40S小亚基富集于mRNA。此外，在mRNA3-端非翻译区一般都富含AU序列，由数个UUAUUUAU八核苷酸核心序列组成，称AUUUA序列。这个序列对翻译效率有抑制作用，其抑制强弱取决于AUUUA序列拷贝数的多少，与距离终止密码子的远近无关。一些短效细胞因子的mRNA内有AUUUA序列，在翻译了一定量的多肽后，立即将mRNA降解，以免过量表达影响细胞的正常状态。第131页,共156页，星期六，2024年，5月12.7.3mRNA的选择性翻译原核生物中常通过操纵子来控制其合成相关蛋白的浓度，而