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生物技术实践
1.(2019年四川成都市七中二诊)成都七中的生物兴趣小组在寒假以“蛋白质的提取和分
离”和“泡菜中亚硝酸盐含量的测定”为课题进行了研究性学习。分析并回答以下问题:
(1)样品处理中红细胞的洗涤要用____________反复冲洗、离心。影响红细胞洗涤效果的
因素包括_____________________________。
(2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是__________________,若要尽快达到理想的透析
效果,可以___________________________(写出一种方法)。
(3)蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率主要取决于__________________________
因素。
(4)装填凝胶色谱柱时,要注意色谱柱内不能有气泡存在,一旦发现气泡必须重装。这是
因为___________________________________。
(5)亚硝酸盐的定量测定可以用________法,在制备样品处理液过程中加入氢氧化铝乳液
的作用是______________________________。
解析:(1)洗涤红细胞所用的溶液是生理盐水,根据渗透作用原理,将红细胞置于低渗溶
液中,红细胞会吸水涨破,释放出血红蛋白。影响红细胞洗涤效果的因素包括洗涤次数、离
心时间和离心速度。(2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是除去样品中的小分子杂质;可
通过增加缓冲液的量或及时更换缓冲液等方法缩短透析时间,能尽快达到理想的透析效果。
(3)净电荷的多少和分子的大小可以决定蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率。(4)装填
凝胶色谱柱时,要注意色谱柱内不能有气泡存在,气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,
降低分离效果,一旦发现气泡必须重装。(5)测定亚硝酸盐的含量可以用比色法,在制备样
品处理液过程中加入氢氧化铝乳液的作用是除去滤液中的色素,使滤液变得无色透明。
答案:(1)生理盐水洗涤次数、离心时间和离心速度
(2)除去小分子杂质增加缓冲液的量或及时更换缓冲液
(3)净电荷的多少和分子的大小
(4)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果
(5)比色除去滤液中的色素,使滤液变得无色透明
2.回答下列与固定化酶和固定化细胞有关的问题:
(1)利用固定化酶技术生产高果糖浆时,需要使用__________________酶,它能持续稳定
地将葡萄糖转化为果糖。
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(2)固定化细胞时,通常采用________(填“包埋法”或“化学结合法”或“物理吸附
法”);与固定化酶相比固定化细胞的优势在于
______________________________________________(答两点即可)。
(3)制备固定化酵母细胞时,需要将休眠状态的干酵母加入________,用玻璃棒搅拌,使
酵母细胞混合均匀,成糊状,放置一定的时间,使其________,此时酵母菌的细胞体积会变
大。
(4)固定化酵母细胞使用海藻酸钠作载体时,溶化后的海藻酸钠溶液需要经
______________,才可加入酵母细胞混合均匀。在制作凝胶珠时应缓慢地将注射器中的溶液
滴加到配制好的________溶液中,并观察液滴在溶液中形成凝胶珠的情形。如果制作的凝胶
珠颜色过浅、呈白色,说明海藻酸钠的浓度偏低,固定的酵母菌细胞数目会偏________。
解析:(1)高果糖浆的生产需要使用葡萄糖异构酶,它能将葡萄糖转化成果糖。(2)因为
细胞个大,酶分子较小,个大的细胞难以被吸附或结合,个小的酶容易从包埋材料中漏出,
所以固定细胞常用包埋法,而固定酶则
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