粮油检验 粮食中交链孢菌毒素的测定 超高效液相色谱-串联质谱法.docxVIP

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粮油检验粮食中交链孢菌毒素的测定超高效液相色谱-串联质谱

法

1范围

本文件规定了主要粮食中四种交链孢菌毒素的超高效液相色谱-串联质谱法测定方法。

本文件适用于小麦、玉米和大米中交链孢酚（AOH,Alternariol）、交链孢酚单甲醚（AME,Alternariolmonomethylether）、交链孢菌酮酸（TeA,Tenuazonicacid）、腾毒素（TEN,Tentoxin）含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

采用酸化乙腈水溶液提取试样中交链孢菌毒素，振荡，离心，经HLB固相萃取柱净化后，液相色

谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

5试剂和材料

除非另有说明，本方法使用的试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.4氨水（NH4OH）：色谱纯，浓度为25%~28%。5.1.5乙酸铵（CH3COONH4）。

5.2溶液配制

5.2.1提取液

乙腈-水-甲酸混合液（850+140+10）：分别量取850mL乙腈、140mL水和10mL甲酸，混合

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均匀。

5.2.2稀释液

乙酸铵溶液（0.05mol/L，pH3）:称取乙酸铵3.85g，溶于970mL水中，用甲酸调整pH至3.0~3.2，

用水稀释至1000mL，混合均匀。

5.2.3淋洗液

甲醇水溶液（5%）：吸取5mL甲醇，加入到95mL水中，混合均匀。

5.2.4洗脱液

甲醇-乙腈-氨水混合液（495+495+10）：分别量取495mL甲醇、495mL乙腈和10mL氨水，

混合均匀。

5.2.5标准曲线溶剂

乙腈-水-甲酸混合液（49.7+49.7+0.6）：分别量取49.7mL乙腈、49.7mL水和0.6mL甲酸，混

合均匀。

5.2.6流动相A

氨水水溶液（0.55mmol/L）：准确移取40μL氨水，用超纯水定容至1L。

5.3标准品

5.3.1交链孢菌酮酸（TeA，C10H15NO3，CAS号：610-88-8），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.3.2交链孢酚（AOH，C14H10O5，CAS号：641-38-3），纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物

质证书的标准物质。

5.3.3交链孢酚单甲醚（AME，C15H12O5，CAS号：26894-49-5），纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.3.4腾毒素（TEN，C22H30N4O4，CAS号：28540-82-1），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.4标准溶液的配制

5.4.1标准储备液（100g/mL）：分别准确称取TeA、AOH、AME、TEN标准品各5mg（精确至0.01mg），用甲醇（4.1.2）溶解，再用纯水定容至50mL，分别制成100μg/mL的标准储备溶液，避光

-18℃保存，有效期6个月。

5.4.2标准中间溶液（1μg/mL）：分别精密量取100μg/mL标准储备液100μL，于10mL容量瓶中，用甲醇（4.1.2）稀释至刻度，配制成浓度为1g/mL的标准中间溶液，避光4℃保存，有效期为1

个月。

5.4.3混合系列标准工作溶液：分别准确量取适量的四种交链孢菌毒素标准中间溶液于容量瓶中，

用标准曲线溶剂（4.2.4）稀释成相应质量浓度的混合系列标准工作溶液（见附录A），现用现配。

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5.5材料

HLB固相萃取柱（6mL，200mg），或性能相当者。

6仪器设备

6.1超高效液相色谱串联质谱仪（UPLC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。

6.2分析天平：感量0.01g和感量0.01mg。

6.3涡旋振荡器。

6.4冷冻离心机：转速≥12000r/min，可设4℃。

6.5氮吹仪