CKMT1A对人鼻咽癌HONE1细胞铂类化疗药物敏感性的影响及机制研究.pdfVIP

CKMT1A对人鼻咽癌HONE1细胞铂类化疗药物敏感性的影

响及机制研究

李刚

【期刊名称】《《中南医学科学杂志》》

【年(卷),期】2019(047)006

【总页数】5页(P576-580)

【关键词】鼻咽癌;线粒体肌酸激酶1A;铂类化疗药物

【作者】李刚

【作者单位】文昌市人民医院耳鼻咽喉科海南文昌571300

【正文语种】中文

【中图分类】R739.6

鼻咽癌发病率位居耳鼻喉恶性肿瘤首位，多发于东南亚，我国广东、湖南等省份为

高发地区[1]。放疗是目前临床治疗鼻咽癌的首选方案，对部分病情严重者常联用

化疗[2]。随着近年来肿瘤治疗水平的不断提升，鼻咽癌患者五年生存率也超过了

80%，但继续上升的难度增加，其中对铂类化疗药物的敏感性较差是其中一个主

要原因[3]。线粒体肌酸激酶1A(RecombinantCreatineKinase,Mitochondrial

1A，CKMT1A)是存在于线粒体膜表面，与细胞内能量传递、ATP再生直接相关

的重要激酶，广泛存在于胃癌、结直肠癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤[4]，但在不同

类型肿瘤中的作用存在差异。相关研究显示，CKMT1A高表达与胃癌、结直肠癌

的恶性程度呈正相关[5]；但与乳腺癌的恶性程度呈负相关[6]。目前关于CKMT1A

在鼻咽癌中的作用仍鲜有报道。顺铂是鼻咽癌患者最常用的铂类化疗药物之一。人

鼻咽癌细胞株HONE1能够敏感地反应出在人体中鼻咽癌细胞的生物学特性，被

广泛用于鼻咽癌相关的体外研究[7-8]。通过前期预实验发现，低浓度顺铂作用人

鼻咽癌细胞株HONE1可上调CKMT1AmRNA表达，但高浓度顺铂则发挥相反

作用[9]。因此，可推测CKMT1A表达水平可能与鼻咽癌铂类化疗药物敏感性有关。

本研究通过细胞转染技术对人鼻咽癌细胞行CKMT1A过表达，探讨对顺铂敏感性

的变化，旨在为提升鼻咽癌铂类化疗药物化疗敏感性提供实验依据。

1材料与方法

1.1材料与试剂

人鼻咽癌细胞株HONE1购于上海博麦德生物技术有限公司。DMEM培养基、胎

牛血清购于杭州仟诺生物科技有限公司。空载体质粒pCMV-Neo-Bam、

CKMT1A过表达载体质粒购于上海百研生物科技有限公司；AnnexinV-FITC细

胞凋亡试剂盒购于上海雅吉生物科技有限公司；小鼠抗人CKMT1A、c-PARP、

BCL2、STAT3、p-STAT3单克隆抗体，兔抗人Bax单克隆抗体购于上海北诺生物

科技有限公司。

1.2方法

1.2.1细胞转染使用DMEM完全培养基常规培养HONE1细胞密度为70%～80%

时，更换成无血清的DMEM培养基，在6孔板中进行转染，具体为：分别将空载

体质粒(空载体对照组)、CKMT1A过表达载体质粒(CKMT1A过表达组)加入含

200μLHEPES缓冲盐溶液的EP管中，再加入150μLPEI混合均匀，室温静置

20min，将混合液加入HONE1细胞中进行转染，常规培养6h后更换DMEM

完全培养基，继续培养24h，用于后续实验。

1.2.2MTT法检测顺铂对两组细胞生长的抑制情况取两组对数生长期细胞，调整

细胞悬液浓度为1×105/mL，胰酶消化，用DMEM完全培养重悬，制成细胞悬液，

按150μL每孔接种于96孔培养板上，37℃、5%CO2培养至约80%融合，更换

成无血清的DMEM培养基，加入梯度浓度的顺铂，继续培养48h，实验终止前4

h每孔加入终浓度为5mg/mL的MTT10μL，继续培养4h。检测前弃去上清，

每孔加入DMSO100μL，振荡5