利用幼胚拯救获得菊属远缘杂种的方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1561694A

(43)申请公布日2005.01.12

(21)申请号CN200410014720.X

(22)申请日2004.04.22

(71)申请人南京农业大学

地址210095江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处钱宝英

(72)发明人陈发棣李辛雷房伟民崔娜欣管志勇

(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司

代理人楼高潮

(51)Int.CI

A01H1/02

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

利用幼胚拯救获得菊属远缘杂种的

方法

(57)摘要

本发明利用幼胚拯救获得菊属远缘

杂种的方法，属于生物技术育种领域。选

择原产我国的菊属二倍体野生种菊花脑与

栽培菊花品种六倍体黄英‘’杂交，采用子

房培养手段进行幼胚拯救，对获得的后代

材料同时进行杂种RAPD鉴定、杂种细胞

学鉴定、杂种形态学鉴定，选择扩增谱带

中出现母本不具有的父本特异带或双亲均

不具有的带、染色体倍性为四倍体、茎、

叶、花序等形态学特征介于双亲之间、出

现父本特异性状或双亲不具有的新的性状

的后代材料，即为获得的种间杂交品种，

实现了菊属种间远缘杂交，创造了一批新

种质。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1、利用幼胚拯救获得菊属远缘杂种的方法，包括；

1)菊属种间杂交后代材料的的获得

选择原产我国的菊属二倍体野生种菊花脑(D.nankingense)，栽培菊花品种六倍体黄‘

英’于温室内进行杂交，以二倍体野生种菊花脑为母本进行人工去雄并套袋隔离，

父本栽培菊花黄英‘’在舌状花微开时套袋，于上午9～10时或下午3～4时授粉，

同一花序重复授粉2次；

杂交后采用子房培养手段进行幼胚拯救，接种时取杂交授粉后13～18d的头状花序，

剥取边缘舌状花的子房，以75％酒精表面消毒30s后置于0.1％(质量比)的升汞溶

液中灭菌5min，无菌水冲洗4～5次后用接种针将子房接入MS添加KT2.0mg/L，

IAA2.0mg/L；BA2.0mg/L，NAA2.0mg/L的培养基上，每瓶接种子房15～20个，

每处理重复12～18瓶；

30d后转入继代培养，继代培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，得到幼苗后转

入MS+BA0.2mg/L的培养基中扩繁，在MS添加NAA0.1mg/L的培养基上生根，

培养温度20～25℃，每日光照10～12h，光照度1600～2000lx，获得菊属二倍体

野生种菊花脑与栽培菊花品种六倍体黄英‘’的种间杂交后代材料；

2)菊属种间杂种的鉴定

对获得的后代材料同时进行杂种RAPD鉴定、杂种细胞学鉴定、杂种形态学鉴定，

其中

在杂种RAPD鉴定时，对获得的种间杂交后代材料进行分子标记鉴定，提取父母

本及后代材料的DNA，然后进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳，获得扩增谱带；

在杂种细胞学鉴定时，对后代材料进行染色体减数分裂观察；

在杂种形态学鉴定时，对杂交父母本及后代材料的形态学进行观察与统计；

选择扩增谱带中出现母本不具有的父本特异带或双亲均不具有的带、染色体倍性为

四倍体、形态学特征为株高27～40cm，冠径44～60cm，分枝性中等～强，叶长

4.6～6.8cm，宽3.0～4.7cm，叶裂中等～深，有托叶，茎紫色，茎及叶片上被绒毛；

花序直径1.8～3.2cm，黄色，初开9月10～20日，盛开9月23日～10月15日，

舌状花17～23，管状花77～116的后代材料，即为获得的菊属二倍体野生种菊花

脑与栽培菊花品种六倍体黄英‘’的种间杂交种