电化学表面增强拉曼散射传感器的构建及miRNA检测.pdf

摘要

研究表明，miRNA的异常表达与多种疾病的发生发展密切相关。开发简单、

灵敏、可靠的miRNAs检测方法，对miRNAs的生物学功能研究、医学诊断、疾病

治疗具有重要意义。表面增强拉曼散射（Surface-enhancedRamanscatting，SERS）

因响应速度快、灵敏度高、水干扰小、多靶标同步分析等优点，在miRNA检测中

显示出巨大的优势。电化学表面增强拉曼散射（EC-SERS）技术通过提供额外电

场增强SERS信号，利用静电作用对目标物质进行富集和分离，有望进一步提高检

测的灵敏度和特异性。本文以开发miRNA新型检测方法为目标，拟在丝网印刷电

极（SPE）上开展EC-SERS研究，构建miRNA新型传感器，发展用于复杂样品中

miRNA的高灵敏、高特异性、准确检测新方法。主要研究内容如下：

1.基于银纳米线修饰的SPE电极（AgNWs-SPE），构建了EC-SERS传感平台，

对2-氨基苯硫酚、二甲基黄、甲基蓝三种不同带电分子的EC-SERS行为进行探究，

验证了EC-SERS传感的可行性。实验结果显示，外加负电位能够增强正电性分子

的SERS信号；通过调节电位能够控制非化学吸附分子的吸附与解析；外加电位对

负电性分子的SERS增强具有适用性。与常规的SERS方法相比，EC-SERS对MB

显示出更低的检出限和更宽的线性范围，证实了EC-SERS技术用于提高分析灵敏

度的可行性。

2.基于脂质体探针协同催化发卡自组装（CHA）的核酸信号放大策略，构建

了基于EC-SERS的miRNA新型传感器，成功用于miRNA-21的检测。识别DNA

序列修饰的脂质体探针（LPO@R6G-hp2）与EC-SERS电极上修饰的捕获序列

（SH-hp1）在miRNA-21存在下形成双链，从而将LPO@R6G-hp2捕获在电极表

面。miRNA-21被LPO@R6G-hp2取代下来再次参与上述过程，通过这种靶标循环

的CHA捕获更多的LPO@R6G-hp2，实现信号的一重放大。随后裂解基底上被捕

获的LPO@R6G-hp2，释放大量的信号分子R6G与SERS基底近距离接触，实现信

号的二重放大。进一步施加负电位对释放的正电性分子R6G进行富集，实现信号

的第三重放大。该传感器成功实现了对miRNA-21的灵敏检测，检出限为28fmol/L，

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线性范围为1.0×10-1.0×10mol/L。

3.基于核壳SERS探针构建了“三明治”型EC-SERS传感器，通过优化SERS

探针和传感策略，提高miRNA-21检测的灵敏度和选择性。通过正电位驱动负电性

的SERS探针和miRNA-21在SERS基底上富集，从而促进CHA循环，使探针与基

底形成更多的“三明治”结构。“三明治”间隙处的强电场耦合能够极大地提高

SERS信号强度，从而提高检测灵敏度。进一步施加反向负电位清除基底上非特异

性吸附的探针，以提高选择性。检测结果显示，该方法的检出限为0.48fmol/L，线

性范围为1.0×10-15-1.0×10-10mol/L，进一步提高了miRNA-21检测的灵敏度，拓宽

了检测范围，为EC-SERS传感器的优化提供了有效途径。

关键词：表面增强拉曼散射；电化学表面增强拉曼散射；miRNA；信号放大；

SERS探针

Abstract

StudieshaveshownthattheabnormalexpressionofmiRNAiscloselyrelatedtothe

occurrenceanddevelopmentofmanydiseases.Thedevelopmentofsimple,sensitiveand

reliabledetectionmethodsformiRNAsisofgreatsignificanceforthebiologicalfunction

research,medicaldiagnosisanddiseasetreatment