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沙眼衣原体诊断研究进展

摘要沙眼衣原体感染在人群中很普遍，

但临床上并未引起重视，本文综述了近年来

诊断沙眼衣原体感染的进展，着重介绍了分

子生物学技术在检测沙眼衣原体中的应用，

并提出了诊断沙眼衣原体的新的扩大的金

标准。

沙眼衣原体感染是发展中国家可预防

的致盲的最重要的原因，也是西方工业化国

家最常见的性病。CT可引起泌尿生殖道感染，

胎儿感染CT可致新生儿结膜炎、新生儿和

小婴儿肺炎，以及其他并发症如获得性反应

性关节炎、Retier’s综合征[1]。由于CT

感染临床表现无特异性，所以常易漏诊。近

年来在确诊CT感染方面进展迅速，本文将

其综述如下。

CT的形态学检查

最初诊断CT感染的实验是吉姆萨染色。

这种方法在CT被分离出来前50年就开始应

用，通过证实被感染细胞内CT包涵体的存

在而判断是否感染CT。但是由于其敏感性和

标本收集上有困难，未能成为一种常规检测

方法。此种涂片染色的标本要求必须有大量

的上皮细胞，而镜检也较费时，同时也受观

测者的主观影响。在诊断男性尿路感染时敏

感性较低，其阳性率仅为培养证实CT感染

的15%。但是在诊断新生儿CT结膜炎时，

Giemsa染色镜检被认为是简便、易行而敏感

的一种方法，50%-90%的涂片可见胞浆内包

涵体及大量多形核白细胞。也可将刮片标本

用甲醇固定，碘染色后镜检，因CT包涵体

含糖原，遇碘呈棕褐色，即阳性。

CT的细胞培养

1956年我国汤非凡教授首次在世界上

用鸡胚卵黄囊培养CT获得成功。10年后，

组织细胞培养CT成功。从病人组织中分离

CT，长期以来都被作为一种确诊试验，但是

非百分之百敏感，培养失败常由于标本多变

或标本收集方法不当而引起。

培养细胞现多常用McCoy细胞或

Hela-229细胞株，BHK-21细胞也对CT易感。

最初操作时使用X线照射过的McCoy细胞，

现常用放线菌酮处理过的单细胞层。细胞培

养过程中，起决定作用的一步是将接种物离

心进入培养的单细胞层内，然后所有细胞在

35℃孵育48-72小时，进行Giemsa染色、

碘染色或单克隆荧光抗体染色，在光学显微

镜下寻找CT包涵体。虽然此方法特异性高

达100%。因受标本采集、保存、转运和培养

等许多因素影响，多数研究显示敏感性仅为

52%-92%[]。

CT的抗原检测

一、酶免疫测定此方法是将酶与单克

隆抗体用交联剂结合起来，形成酶标抗体，

检测标本中有无CT抗原。如有CT抗原，则

与酶标抗体发生特异性反应，加入酶的底物，

底物被酶催化生成可溶性或不溶性呈色产

物，即为阳性。可用肉眼或分光光度计定性

或定量，其敏感性为93%-98%，10分钟可出

报告。

二、直接荧光抗体试验此方法是利用

荧光标记的单克隆抗体检测标本中有无CT

抗原。其诊断新生儿CT结膜炎的敏感性高

达95%-100%，20分钟可出报告，但需用荧

光显微镜观察。Thomas等用不同方法测定宫

颈拭子标本中的CT，EIA可检出稀释至

10-5～10-6的原体；而DFA对稀释至10-8

后的EB仍可阳性，敏感性较EIA为高。

核酸扩增技术

近年来，随着分子生物学的发展，核酸

扩增技术在常规感染的诊断中很快建立。这

些技术主要有扩增探针、聚合酶链反应、连

接酶链反应、核酸自身连续序列复制技术和

Q-B复制酶试验。

一、扩增探针法由于非培养检测方法

不断发展，DNA杂交也逐渐被应用于诊断CT

感染。通常这些实验特异性较高，但并非最

敏感。由于需要放射性元素标记的探针而限

制了其应用随着分子生物学发展、硫标记的

DNA探针及生物素标记的DNA探针解决了这

些问题。近年来采用DNA探针直接检测CT

tRNA及增强化学发光探针实验提高了检测

的敏感性。扩增探针系统依赖于检测标志的

扩增，而不是模板DNA本身被扩增。与预期

模板互补的DNA克隆进入M13噬菌体载体，

分离单链DNA在固相支持物上针对模板DNA

进行杂交，与M13噬菌体基因互补的第二个

探针包裹载体序列，通过碱性磷酸酶而被检

测。Tho