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第21颗表型检测:细胞迁移(1)
细胞的过程
划痕实验检测细胞迁移
划痕实验(Scratchassayorwound-healingassay)检测细胞迁移的
原理:
◼让细胞长成单层。
1
◼制造划痕,留出一些空间来,测试细胞能不能往划痕的方向。
◼使用丝裂霉素或无处理使细胞停止。
划痕实验检测细胞迁移的操作流程:
标记六使用marker笔在6的底面画平行线。
细胞悬液:细胞悬液。
调整细胞浓度:保证每组细胞铺板密度一致,并且第二天能刚好长成单层。
制造划痕:用直尺比照着,使用10ul枪尖,枪尖紧贴培养板底,与培养板底垂直划过
细胞层。
PBS洗:吸去培养基,PBS轻柔洗3次,洗去漂浮细胞
换液:换无培养基,或含2%FBS的培养基。
定时拍照或实时检测:以预先做好的标记为定点观测点来进行定时拍照,或者使用实
时检测设备进行实时的检测。
◼适用于检测贴壁的细胞。
◼不适用于检测组织样本。
2
细胞划痕实验检测细胞迁移实验分组设计:
数据处理与绘图:
使用软件分析每个时间点划痕的宽度或划痕的面积(可以使用imageproplus
或imagej)。
使用imageproplus可以测量划痕位置的面积和高度,将面积除以高度可以得
到平均的划痕宽度,将0点的划痕宽度减去实验结束时的划痕的宽度,得到的就是
细胞迁移的距离,然后使用距离值按如下进行计算migrationindex。
计算如为:
migrationindex=migrationdistanceoftestgroup/migratancedistanceof
controlgroup
将3次独立重复的数据都分析完后进行统计分析并绘制柱状图。
3
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