实验一-鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法.pdfVIP

实验一-鸡新城疫血凝(HA)和血

凝抑制(HI)抗体水平测定法

LT

HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法

．本次实验的目的和要求

掌握鸡新城疫血凝（）和血凝抑制（HI）

抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定

合理免疫程序。

2．实验内容或原理

某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能

够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集

现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中

加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制

试验(HI)。

3．需用的仪器或试剂等

动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。

器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离

心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料

管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集

试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微

量移液器、脱脂棉等。

药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓

冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）

红细胞悬液；（5）待检血清

4．实验步骤

(1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离

后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性

的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病

毒。

(2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期

和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体

效价有4倍以上升高，即有诊断意义。

（3）免疫机体抗体效价的测定：

3.鸡新城疫（ND）的HA和HI

（1）试验准备

①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干

苗作为已知抗原，进行试验。

②0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，

放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入

3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速

混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存

液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保

存两周。

红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，

经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去

上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红

细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000

转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液

洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的

红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫

升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。

③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过

的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量

法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室

温中静置或离心，待血清析出后使用。每只鸡应

更换一个注射器，严禁交叉使用。

④稀释液：为灭菌的生理盐水。

⑤红细胞保存液的配制方法：葡萄糖2.05克，

柠檬酸钠(SHOO)0.80克，柠檬酸(2H0)0.055克，

2

氯化钠0.42克，蒸馏水加至100毫升。过滤分

装，高压灭菌10分钟，放4℃冰箱保存。

(2)红细胞凝集试验(HA)主要是测定病毒的红

细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验所用病

毒稀释倍数(抗原单位)。

鸡新城疫病毒的HA试验与HI试验现采用

微量法，以u或v形微孔塑料板代替试管。

①首先用移液器向每个孔加入稀释液一滴(0.05

毫升)。

②用

微量移振荡1-2min，静置20min

液器取

病毒抗

原0.05

毫升，

加入第

一孔，

反复抽

动6次

后，吸

出0.05

毫升加

入第

作用

时间

与温度

红细胞悬液252525252525252525252525

作用时间振荡1-2min，静置30-60min

与温度

结果1——