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藤茶中二氢杨梅素的提取及其抗炎活性评价

【摘要】藤茶是葡萄科植物大叶蛇葡萄的茎叶，具有平肝降压、清热利湿、活血消淤、补脾润肺等特殊功效。藤茶中富含黄酮类成分，包括槲皮素、山奈酚、橙皮素、杨梅素、二氢杨梅素等。藤茶中二氢黄酮类化合物含量的是目前国内外已发现的植物中最高的，其中二氢杨梅素的含量有30%以上。二氢杨梅素是藤茶中的主要活性成分，具有自然资源丰富、纯天然、安全性高、副作用小等优点，在研究、开发、利用方面具有极高的价值，可应用于食品、医药、农畜等领域。本文主要对藤茶中的二氢杨梅素进行提取，粗提物提纯后通过电喷雾质谱（ESI-MS）对其进行表征，并通过斑马鱼实验对其抗炎活性进行评价。具体工作如下：

通过热水提取法对藤茶中的二氢杨梅素进行提取。

对二氢杨梅素粗提物进行提纯，并通过电喷雾质谱（ESI-MS）对其进行表征。

通过斑马鱼实验对二氢杨梅素进行抗炎活性评价。

【关键词】二氢杨梅素；提取与表征；抗炎活性评价

绪论

引言

藤茶是葡萄科植物大叶蛇葡萄的茎叶，又名山甜茶、莓茶、端午茶等，它广泛地分布于我国的南部云南、江西、贵州、广东、福建等多个省份。藤茶的气味甘淡，性清凉，具有平肝降压、清热利湿、活血消淤以及补脾润肺的作用。它主要用于黄疸型肝炎，风热感冒、咽喉肿痛、咳嗽痰多等疾病的治疗[1,2]。目前多种黄酮类化合物可以从藤茶提取和蔗糖分离聚合得到，包括槲皮素、山奈酚、橙皮素、杨梅素、二氢杨梅素等。藤茶中二氢黄酮类化合物的含量是目前国内外已发现的植物中最高的，其中二氢杨梅素的含量有30%以上[3,4]。二氢杨梅素是藤茶中主要生理活性成分，在缓解酒精中毒，预防酒精肝、脂肪肝，减少慢性肝癌的风险和发生率，抗菌，抗炎和抵御恶性肿瘤，提高SOD活性等多个方面均具有特别好的疗效。二氢杨梅素具有自然资源丰富、纯天然、安全性高、副作用低等优点，在研究、开发、利用方面具有极高的价值，可以广泛应用于食品、医药、畜牧业等领域[5,6]。虽然藤茶的自然资源丰富，且二氢杨梅素含量相对较高，但人们对藤茶中的二氢杨梅素的提取利用率较低。因此，我们对二氢杨梅素的提取及生理活性机制进行探究。

二氢杨梅素的理化性质

二氢杨梅素是一种多酚羟基双氢黄酮醇，其化学式为C15H12O8，分子量为320.25；常温状态下为白色或类白色粉末，易溶于热水、丙酮，微溶于醋酸乙酯，不溶于石油醚、氯仿[7]。二氢杨梅素的结构式见图1，因含有邻三酚羟基结构，容易被氧化，化学稳定性较差，它的稳定性受pH值、温度、金属离子的影响。其中何桂霞的研究发现二氢杨梅素在PH≤4的弱酸性环境中是稳定的，但它的氧化速度会随着pH的增加而增加，在pH≥9的碱性环境中会立即被氧化而变成黄色。在温度≤100℃，时间≤30min的条件下加热，二氢杨梅素的化学结构不会发生变化，但它的稳定性会随着温度的上升和反应时间的延长而下降甚至会发生不可逆的氧化反应[8,9]。金属离子如Mg2+、Na+、

Ba2+、Ca2+不会影响二氢杨梅素的稳定性，而过渡态金属离子Fe3+、Cu2+、Al3+等则会催化二氢杨梅素的氧化作用

[10]。药物的化学结构和它的药理活性有关，对药物的化学结构进行修饰从而增强药理活性及获得合适的剂型，已成为学者们的研究重点。

图1二氢杨梅素结构式

二氢杨梅素的药理作用

1.3.1保肝护肝作用

二氢杨梅素（DMY）是藤茶中的一种黄酮类化合物。它具有广泛的药理作用，包括平肝降压，化瘀消肿，抗炎抗菌抗肿瘤等。乙醇代谢物乙醛经二氢杨梅素的作用可以快速分解转换成无毒物质，从而减少其对肝细胞的损害。此

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外，二氢杨梅素可改善肝细胞受损引起的血清乳酸脱氢酶活性的增加，抑制肝M细胞胶原纤维的形成，减少酒精对肝脏的伤害[11]。有越来越多的证据支持在动物模型中使用DMY不仅可以治疗酒精使用障碍(AUD)，还可以减少/预防

ALD。例如，Shen和同事发现DMY增强了GABAA受体的活性，并降低乙醇对同一受体的影响。受体活性的增强使DMY降低了乙醇对肝脏的影响，并减少了大鼠的酒精戒断综合征。研究还发现DMY可以通过增加自噬和减少炎症反应的机制，减少肝脏中依赖乙醇的脂质积累，进一步说明DMY对乙醇引起的肝脏损害有保护作用[12]。

DMY保护肝脏的作用可能与其保护细胞对抗炎症反应和氧化物质的能力有关。在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和

HepG2肝母细胞瘤(HB)细胞中，DMY已被证明可以通过调节机制和清除自由基的能力来降低ROS和氧化应激。DMY还被证明可以通过改变涉及Bcl-2、Bax的线粒体凋亡途径以及caspase-9/caspase-3的激活来保护HUVEC免受氧化应激损伤，同时在体外诱导自噬并减少脂质积累和脂肪生成。DMY的保护作用也被归因于它的