菌种管理培训.pptx

菌种

·基本概念：

·标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。

·标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培养物。

·商业派生菌株：由供应商提供的所有特性与标准菌株等效的菌株。

·代：将活的微生物接种到新鲜培养基中进行培养，并希望获取新的微生物培养物。这种操作方式，新培养物对接种培养物而言就称为一代。

·工作菌株：由标准储备菌株经传代得到的培养物。

菌种一菌种保藏的概念

·菌种保藏机构

·目前，世界上约有550个菌种保藏机构。

·国外的菌种保藏机构：

·世界菌种保藏联合会(WFCC)

·美国菌种保藏中心(ATCC)

·美国农业部“北部地区研究实验室”(NRRL)·英国“国立标准菌种收藏所”(NCTC)

·英国“国际真菌研究所”(CMI)

·荷兰“真菌中心保藏所”(CBS)

·日本微生物菌种保藏联合会(JFCC)

菌种一菌种保藏的概念

菌种一菌种保藏的概念

·我国的菌种保藏机构

·普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)·农业微生物菌种保藏管理中心(ACC)

·工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)·医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC)

·抗菌素菌种保藏管理中心(CACC)

·兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)·林业微生物菌种保藏管理中心(CFCC)

·专利微生物菌种保藏管理中心

菌种一菌种保藏和使用的法规

·《中国药典》2015年版

·实验室认可准则

·其他行业标准

·中国药典2015年版

·药品微生物实验室规范指导原则中对菌种有了较为明确的规定·允许使用标准菌株和商业派生菌株

·标准菌株应按保藏机构提供的说明进行复活

·标准储备菌株应进行纯度和特性确认

·标准储备菌株建议采用低温冷冻干燥、液氮贮存或超低温冷冻保藏的方法·标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株

·冷冻菌株解冻后不得重新冷冻和再次使用

·工作菌株不可替代标准菌株，商业派生菌株仅可用作工作菌株

菌种一菌种保藏和使用的法规

·菌种保存的原理是根据菌种的生理、生化特性，在人工创造的条

件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本上处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。

低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。因此低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。

菌种一菌种保存的原理

·选择适宜的培养基、培养温度和菌龄，以便得到健壮的细胞或孢

子；保存于低温、隔氧、干燥、避光的环境中，尽量降低或停止微生物的代谢活动，减慢或停止生长繁殖；不被杂菌污染，在较长时期内保持著生活能力。

菌种一菌种保藏的要点

·菌种保存方法有多种，如琼脂斜面低温保存法、液体石蜡保存法、

干燥(沙土)保存法、冷冻真空保存法、浓氮超低温保存法等。

但对不同的微生物应通过保存试验来选择最适宜的保存方法。

·注意事项：保存的菌种均应是新鲜纯菌培养物，至少应是第三代的培养物。不同细菌用不同培养基，定期检查菌种保存环境做好记录。

菌种一菌种保藏的方法

·琼脂斜面低温保存法：

·此方法是实验室菌种最常用的保存方法，具有操作简便，使用方便的优点。具体方法是：用无菌的接种环挑取菌株—环，划线于适宜的琼脂斜面(细菌为营养琼脂斜面、真菌为改良马丁琼脂斜面)上，细菌置37℃培养18~24小时，真菌置25℃培养18~24小时。

菌种一菌种保藏的方法

·矿油封藏法：

·将化学纯的液体石蜡(矿油)经高压蒸气灭菌，放在40℃恒温箱中蒸发其中的水分,然後注入斜面培养物中，使液面高出斜面约1厘米。将试管直立，放在15-

20℃室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体，既能隔绝空气，又能防止培养基因水分蒸发而干燥，可以延长菌种保藏的时间。但注入的液体必须不与培养基混溶、对菌种无毒，不易被利用和挥发。此法适用于酵母菌、芽孢杆菌；不适用于固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、法门氏菌和毛徽目中的大多数属种。此法简便易行，但必须注意防火和污染

菌种一菌种保藏的方法

·甘油冷冻管保存法：

·用无菌接种环挑取菌种接种在相应的琼脂培养基斜面上，置适宜的培养条件培养后，加入含0.05%聚山梨脂80的胰酪大豆胨液体培养基3~5ml,并通过接种环轻轻刮取菌苔，使细菌充分扩散，制成菌悬液，再加入等体积的、浓度为20%的无菌甘油溶液，轻轻振摇，最后分装于无菌小试管中，置-30℃条件下保存，-80℃保存效果更佳

菌种一菌种保藏的方法

菌种—菌种保藏的方法

·此法应注意菌悬液的浓度应高一些，另外甘油的浓度不宜过高，

否则影响细菌细胞渗透压，引起细菌死亡。厌氧菌不宜用此法保存。

·沙土管法：

·将沙或土过筛、烘干、装管、灭菌、然後将菌种制