《生物药物分析与检验》第3章免疫分析法.pptx

第3章免疫分析法

;主要内容;一、概述;什么是免疫分析？

基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种技术手段。抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发生的特异性结合反应。它既可以发生在体内，也可以发生在体外。高选择性和低检出限。

在体内发生的抗原抗体反应为体液免疫应答的效应作用。体外的抗原抗体结合反应主要用于抗原或抗体的检测，用于免疫学诊断。;在药物分析中，免疫分析法的应用主要集中在以下几方面：

(1)在实验药物动力学和临床药物学中，测定生物利用度和药物代谢动力学参数等生物药剂学中的重要数据，以便了解药物在体内的吸收、分解、代谢和排泄情况；

(2)在药物的临床检测中，对治疗指数小、超过安全剂量易发生严重不良反应或最佳治疗浓度和毒性反应浓度有交叉的药物血液浓度进行监测；

(3)在药物生产中，从发酵液或细胞培养液中快速测定有效组分的含量，以实现对生产过程的在线监测；

(4)对药品中是否存在特定的微量有害杂质进行评价。

;免疫分析：

利用抗原与抗体的特异性结合作用，来选择性识别和测定，可以作为抗体或抗原的待测物.

免疫分析方法;;;特异性：抗原与抗体结合反应的专一性

分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性;可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体，解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。

影响因素：

抗体对相应抗原的亲合力－亲合力越高，结合越牢固，越不易解离

环境因素对复合物的影响－pH、离子强度

;;二、抗原;免疫原性（immunogenicity)：能刺激机体发生免

疫应答，产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。

免疫反应性：能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。

凡具有免疫原性和抗原性的物质称为完全抗原

只有抗原性而不具有免疫原性的物质称为半抗原

半抗原+蛋白质——完全抗原

赋予半抗原以免疫原性的蛋白质称为载体

;（一）抗原的免疫原性;1、异物性;2、一定的理化性状;3、完整性;4、宿主遗传性;（二）抗原的特异性;1、抗原决定簇;种类和数量

一个抗原分子可??有一种或多种不同的AD，一种AD决定着一种特异性，多种AD决定着多种特异性。

部位

位于抗原表面的AD能直接被相应淋巴细胞所识别，称功能性决定簇，存在抗原分子内部的AD无激发免疫应答的功能，称隐蔽决定簇。只有经理化因素处理后，使之暴露可能成为新的功能决定簇。

;大小

抗原决定簇的大小与相应抗体的抗原结合部位相当。

一个蛋白质抗原决定簇含5-7个氨基酸残基

一个多糖抗原决定簇含5-7个单糖

一个核酸半抗原决定簇含6-8个核苷酸

抗原结合价（antigenicvalence)是指能和抗体分子结合的抗原决定簇的总数。

半抗原为一价

天然抗原的分子结构复杂，分子表面有多个决定簇为多价;2、AD的分类;3、共同抗原和交叉反应;（三）药物分子的抗原性;3、药物分析中，为了得到高效价的抗血清，通常会与蛋白质载体合成人工抗原进行试验。

常用载体：牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OA）、破伤风类毒素（TT）、钥孔蛋白（KLH）等。;（1）半抗原和载体结合的化学反应

多肽类激素：活化蛋白质或多肽的游离羧基形成肽键；与蛋白质或多肽的游离氨基缩合形成肽键

甾体：甾体激素的羟基和酮基不能直接和载体蛋白形成有效的共价键，需要制备甾体的衍生物，通过含游离羧基的甾体衍生物与载体蛋白相连

抗生素：?-内酰胺环在偏碱性条件下可以与蛋白质的自由氨基以酰胺键的形式共价结合；氨基糖苷类抗生素用碳化二亚胺为连接剂实现药物和载体蛋白的连接;在选择结合半抗原的化学反应时，应考虑不同的连接方式可能对抗体的专一性产生不同的影响。

半抗原没有可以结合的官能团时需要合成适当的衍生物。

为得到特定抗原决定簇相对单纯的合成抗原，需要根据半抗原的化学特性及连接产物的化学特性选择连接的半抗原。

;（2）半抗原和载体的选择原则;载体选择原则：

应考虑载体对检测系统的影响：选择的载体应和检测体系不发生交叉反应；用于包被合成抗原的载体和用于免疫动物产生抗体的合成抗原的载体蛋白不同。

免疫过程中考虑载体效应的影响：抗体的特异性依赖于半抗原分子结构中的免疫决定区，但整个载体蛋白大分子对于抗体反应的性质和量也有影响；应使用相同载体的合成抗原制备半抗原抗体。;（3）合成抗原的测定;;三、抗体与免疫反应;（一）、抗体的结构与功能

;抗体（antibody，Ab）：是由抗原进入机体刺激B细胞分化增殖为浆细胞而合成并分泌的一类能与相应抗原发生特异性结合并产生免疫效应的含有糖基的球蛋白。抗体分布于体液（血液、淋巴液、组织液及粘膜的外分泌液）中，主要存在于血清内。;1.抗体（antibody