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多特异性抗体免疫原性风险评估

前言

免疫原性风险评估是生物药物开发的重要组成部分。多特异性抗体在

治疗方面表现出特异性好、选择性好等特性，但由于其结构组成、大

小、是否含有Fc及靶点结合亲和力等因素，容易产生免疫原性，且

风险评估挑战大。

01多特异性抗体的免疫原性来源

序列注意事项

氨基酸序列和T细胞表位含量是产生免疫反应风险的主要因素。多特

异性疗法采用多种蛋白质工程技术，以非天然方式将特定的结构域汇

集在一起，以便同时进行多靶点识别，例如knobs-in-holes、CrossMAb、

Triomab、SEED、CODV、DART®、TRIDENT、BiTE®、BiKE、TriKE、MATCH、

nanobody、diabody、diabody-Ig等。

这类设计和优化的单价或多价的抗体药可能会增加抗体分子的免疫

原性。例如，使用抗体片段和接头分子可能导致产生全长亲本抗体中

不存在的新表位，或暴露隐藏在亲本抗体结构中的隐藏表位。与亲本

抗体相比，这些表位可能会增加双特异性抗体的免疫原性风险。

关键质量属性（CQA）

CQA风险因素也与多特异性抗体相关，如蛋白质聚集体、翻译后修饰、

宿主细胞和工艺相关杂质（如HCP、HCD、内毒素、色谱树脂、污染

物和降解物等）、制剂赋形剂和容器封闭等。鉴于多特异性抗体分子

中不同功能域的非天然排列，与靶蛋白可能形成大型复合物，导致免

疫原性风险增加。如ABT-122和JNJ在阿达木单抗（TNF-

α，三聚体）骨架上添加IL-17A结合域（IL-17A，二聚体）的双抗。

在健康志愿者研究中，发现ABT-122和JNJ的ADA发生率

分别为99%和100%。

免疫调节

多特异性疗法关于免疫调节数据在不断增加，免疫原性风险因素逐渐

成为关键因素。如药物分子是否涉及多个免疫检查点的拮抗作用？是

否结合B细胞？是否涉及免疫检查点激动作用？nivolumab单一治疗

时ADA体发生率为11.2%，nivolumab与ipilimumab联合治疗时ADA

跃升至37.8%。CD3是桥联细胞的常用靶点，而CD3的结合似乎容易

产生ADA反应，如otelixizumab或teplizumab。此外，靶蛋白为多

聚体膜蛋白的抗体分子，可介导细胞表面的复合物形成。当这些靶点

在抗原呈递细胞中表达时，可以促进复杂的摄取并增加T细胞介导的

适应性免疫应答。

02多特异性抗体生物分析策略

多特异性抗体药物较传统单抗药物更为复杂，整合PK、ADA和PD数

据有助于了解免疫原性的临床影响。运用科学和战略性的判断非常重

要，需要充分考虑测定形式、样品收集的预分析以及靶标和治疗方法

的潜在生物学。

药代动力学PK

一般多特异性抗体药物PK方面的要求与单抗药物相同，但需要对其

固有特性予以特殊考虑。如用竞争的抗独特型抗体或靶点蛋白只能检

测同时具有未占据的抗TNF-α和未占据的抗IL-17A的完全游离抗体

分子。还需要额外检测游离adalimumab或游离IL-17A结合域，可以

用两种靶点的竞争型抗独特型抗体与非竞争型抗独特型抗体配对，分

别检测两种游离形式的分子。

抗药抗体ADA

与PK生物分析策略考虑类似，多特异性抗体免疫原性测定的选择和

开发，也应在药物开发阶段进行适当的科学和战略性思考。桥接法测

定ADA可以检测不同结合亲和力水平和不同亚型的ADA，但这需要所

检测的样本具有高Ctrough。另外，方法学开发要充分掌握靶点特点

和药物结构。通常基于细胞的抗药物中和抗体(nAb)评估被认为是金

标准。如HC-12的整个临床开发过程中评估nAb很重要，但我们建议

不要开发专门的中和抗体检测方法。相反，一种利用游离PK、PD和

ADA等测定数据整合方法，比使用独立的nAb测定更具信息价值。FDA

指南指出，以数据整合方法判断ADA中和活性具有潜力。

药效PD

就HC-12而言，基于治疗药物的作用机制，适当PD评估可能包括循

环系统中游离TNF-α和IL-17A细胞因子以及自身免疫性疾病标志物

的定量检测。虽然更具挑战性和复杂性，但其PD评估可能包括TNF-

α、IL-17A通路特异性细胞应答。基于假设，这种PD生物标志物应

该可以很好地跟踪药物浓度水平，并且以足够灵敏检测nAb反应。

以上研究案例说明充分了解药物和靶标的潜在四级结构对于多特异

性抗体药物研究尤为重要。这些结构可能形成大型免疫复合物来增加

免疫原性发生率。对于多特异性疗法，在风险评估中考虑药理学对免

疫原性的潜在影响至关重要。

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