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乳酸菌的分离和初步鉴定

乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。利

用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。这在发酵乳工业中已经得到广泛的

应用。利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。因而分离

和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。本报告采用BCG牛乳培养基琼

脂平板筛选和分离乳酸菌，利用镜检观察到了链球状和杆状两种形状。通过吲哚试验和糖

发酵试验以及小型发酵实验证明该菌种为乳酸菌，杆状的叫做短乳杆菌，链球状的叫做乳

链球菌

1.材料和方法

1.1材料

1.1.1选用沈阳乳业有限责任公司乳品一厂生产的辉山纯酸奶

1.1.2培养基

BCG牛乳培养基

A(溶液)：脱脂奶粉100g,水500ml,加入1.6%溴甲酚绿（B.C.G）乙醇溶液1ml,

80摄氏度灭菌20min.

B(溶液)：酵母膏10g,水500ml,琼脂20g,PH:6.8121摄氏度灭菌20min

以无菌操作趁热将A,B溶液混合均匀后倒平板。

乳酸菌培养基

牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,葡萄糖10g,乳糖5g,氯化钠5g,

水1000ml,PH:6.8

121摄氏度湿热灭菌20min

蛋白胨水培养基

蛋白胨10g,氯化钠5g,水1000ml,PH:7.2~7.4

121摄氏度湿热灭菌20min

糖发酵培养基

蛋白胨水培养基1000ml,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1~2ml,PH:7.6,另配20%糖溶液

（葡萄糖，蔗糖）各10ml.

制法：

1）.将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（PH:7.6）分装于试管中，在每管内放一倒置的

小玻璃管（Durhemtube）,使充满培养液。

2）.将已分装好的蛋白胨水培养基和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水培养基121

摄氏度灭菌20min,糖溶液112摄氏度灭菌30min.

3).灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%的糖溶液0.5ml,则成1%的浓度。

1.1.3有关溶液

1.6%溴甲酚紫乙醇溶液：溴甲酚紫1.6g溶于100ml乙醇中，贮存于棕色瓶中保存备

用。

吲哚试剂：对二甲基氨基苯甲醛8g,95%乙醇760ml,浓盐酸160ml.

10%硫酸

2%高锰酸钾

含氨的硝酸盐溶液：称取硝酸银2g,蒸馏水100ml,待硝酸银溶解后，取出10ml备用，

向其余的90ml硝酸银中滴加氨水，即可形成很厚的沉淀，继续滴加氨水至沉淀刚刚溶解成

为澄清溶液为止，再将备用的硝酸银慢慢滴入，则溶液出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的

沉淀又消失，继续滴入硝酸银，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。

1.2方法

1.2.1乳酸菌的分离提纯

直接用接种环蘸取纯酸奶平板划线分离，置40摄氏度培养48小时。挑选出乳酸菌进行

连续6次以上的传代，以达到提纯。

1.2.2乳酸菌的鉴定

吲哚试验

1）.试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管2支，分别标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的

不接种，置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。

3）.观察记录：在培养基中加入乙醚1~2ml,经充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻

后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层

呈玫瑰色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。

糖发酵试验

1）.试管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各2支，每种糖发酵试管中分别

标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的

空白对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置试管中，置37摄氏度恒温培养箱中培养

24小时，观察结果。

3）.观