核酸血液筛查上海浩源.ppt

核酸血液筛查相关技术P**dUTP-UNG作用示意图核酸血液筛查相关技术P**dUTP-UNG优缺点缺点优点TextText防止含dU产物的污染不影响目的片段的扩增作用条件简单，易实现。只防自身产物的污染，不防天然产物的污染。若混有核酸酶，会同时分解目的产物。UNG致使CT值增加，易导致假阴性。dUTP在对GC丰富的模板时作用不大。灭活不够完全。相对用dTTP，成本高。核酸血液筛查相关技术P**内对照分子TextText内参照的概念人工合成的小片段DNA，放在反应液中和待测目的基因一起扩增。内对照是PCR方法检测疾病基因的必需成分，是防止假阴性、提高检测结果可靠性的重要标示。内对照对整个实验流程，包括样品提取、分装、PCR热循环仪孔间差、PCR抑制元素等等可能的影响因素进行监控，防止假阴性，提高安全性核酸血液筛查相关技术P**竞争性内对照分子3’5’5’3’3’5’120291310(BP)两端为特异性引物目的基因片段内对照顺序竞争性内对照的概念与目的基因使用相同的引物。扩增产物序列与目的基因不同，可用不同的探针检测。核酸血液筛查相关技术P**竞争性内对照分子3’5’5’3’3’5’120291310(BP)内对照特异性引物目的基因片段内对照顺序非竞争性内对照的概念与目的基因使用不同的引物。扩增产物序列与目的基因不同，可用不同的探针检测。目的基因特异性引物核酸血液筛查相关技术P**内对照分子内对照的作用真实反应扩增效率避免假阴性：假阴性是目前血液筛查中最重视的问题之一，内标全程进行质量监控质控血筛核酸检测的内对照设计理念中心理念：监测全程的实验过程包含病毒核酸提取、反转录、及扩增过程的效率。内对照选用：最好能达到上述三个条件，且能顾及仿真病毒的安全性。核酸血液筛查系统P**1核酸血液筛查系统2核酸检测样本汇集设备3自动化核酸提取设备4PCR扩增和扩增产物的检测设备核酸血液筛查系统P**核酸血液筛查系统分析后样本分析中分析前检测结果纯化试剂准备仪器维护自检准备：质控样本试剂前处理混样信息录入扩增检测核酸纯化检测系统试剂`设备质控品检测试剂的准备核酸血液筛查系统P**核酸检测样本汇集设备加样器HAMILTON液体工作站核酸血液筛查系统P**自动化核酸提取设备自动化核酸提取(EZbeadsystem-32)核酸血液筛查系统P**PCR扩增和扩增产物的检测设备ABI7500实时荧光定量PCR仪血站核酸检测样本的采集、运送和保存P**1样本的运送2样本的接收与保存3样本的采集血站核酸检测样本的采集、运送和保存血站核酸检测样本的采集、运送和保存P**关注采集、保存、运输的细节213采血管离心运输条件核酸血液筛查*P*分子生物学概论一核酸血液筛查相关技术二三目录P*核酸血液筛查系统*四血站核酸检测样本的采集、运送和保存三PCR实验室的污染防治分子生物学概论P**核酸的分子组成-核苷酸分子生物学概论P**CytosineAdenineThymineGuanineHydrogenBondsDeoxyribose(Sugarmolecule)PhosphoricAcid(Phosphatemolecule)由A/T/G/C四种单核苷酸组成分子生物学概论DNA的二级结构P**DNA双螺旋结构DNA分子由相互平行、走向相反、碱基互补的两条脱氧核糖核苷酸链围绕同一中心轴，盘绕成双螺旋结构，螺旋的一侧为大沟，另一侧为小沟。平行链对应碱基总是A==T、G===C配对（basepairing)或互补，形成稳定联系。分子生物学概论P**DNA热变性后缓慢冷却处理过程称退火annealingDNA加热变性后，若经骤然降温，互补链碱基之间来不及配对互补，形成氢键联系，两链维持分离状态。慢骤分子生物学概论P**核酸分子杂交hybridization当不同来源的核酸变性后一起复性时，只要这些核酸分子中含有相同序列的片段，即可形成碱基配对，出现复性现象，形成杂种核酸分子，或称杂化双链，称核酸分子杂交。分子生物学概论P**DNA半保留复制DNA合成进行时，以两条亲代DNA链中的每—条链为模板，在DNA指导下的DN