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同种内切酶生产的粘性末端的连接同尾酶生产的粘性末端的连接不同粘性末端的连接粘性末端的更换人工粘性末端的连接重组率
同种内切酶生产的粘性末端的连接55GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGEcoRI5GCTTAAAATTCG55GCTTAA55AATTCG5退火GCTTAAAATTCG5GCTTAA5AATTCGGCTTAAAATTCG5GCTTAA5AATTCGT4-DNAligaseGAATTCCTTAAG55GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAG55GAATTCCTTAAG
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不同粘性末端的连接BamHI55GGATCCCCTAGGGGATCCCCTAGG5GCCTAGGATCCG55CTGCAG5GACGTC3T4-DNAligaseCGATCCGCTAGG55GGATCGCCTAGC5CTGCAGGACGTC5PstI3T4-DNApol切平5CG5GCKlenow补平5GGATCCCTAGGATCC5CTAGGCGATCCGCTAGG55GGATCGCCTAGC
人工粘性末端的连接5‘突出末端5GCCTAGGATCCG55GCTTAA555AATTCGT4-DNAligase55Klenow补平Klenow补平5GGATCCCTAGGATCC5CTAGG5GAATTCTTAA555AATTCTTAAGTdTTdTdGTPdCTPGAATTGGGGGGCTTAAAATTCGGGGGGTTAAGGGATCCCCCCCCCTAGGATCCCCCCCCCTAGGGAATTGGGGGGGATCCCTTAACCCCCCCTAGGGGATCCCCCCCAATTCCCTAGGGGGGGTTAAG55GAATTGGGGGGGATCCCTTAACCCCCCCTAGGGGATCCCCCCCAATTCCCTAGGGGGGGTTAAG退火BamHIBamHIEcoRIBamHI
人工粘性末端的连接3‘突出末端CTGCA3GG3ACGTC5GCATG3C5C3GTACGT4-DNAligaseTdTTdTdCTPdGTPGCATGCCCCCC3C退火PstIPstIC3CCCCCCGTACGCTGCAGGGGGG3GG3GGGGGGACGTC55GCATGCCCCCCGCGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCGCCCCCCGTACG55GCATGCCCCCCGCGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCGCCCCCCGTACG55GCATGCCCCCCTGCAGCGTACGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCATGCGACGTCCCCCCGTACG55GCATGCCCCCCTGCAGCGTACGGGGGGACGTCCTGCAGGGGGGCATGCGACGTCCCCCCGTACGKlenowPstISphI
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粘性末端的更换BamHI55GGATCCCCTAGGT4-DNAligaseKlenow补平GATCC5G5GCCTAG555GGATCCCTAG5GATCCCTAGG55GGATCGGAATTCCGATCCCCTAGCCTTAAGGCTAGG55EcoRIGGAATTCCCCTTAAGGEcoRIlinker
重组率重组
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