NSUN5在先兆子痫发病中的作用及机制研究.pdfVIP

目录

摘要I

AbstractIII

中英文缩略词表VI

第一章前言1

1.1先兆子痫（Preeclampsia,PE）1

1.1.1先兆子痫的定义1

1.1.2先兆子痫的分类1

1.1.3先兆子痫的发病机制研究进展2

1.1.4先兆子痫的预测研究进展4

1.2蜕膜化（Decidualization）5

1.2.1蜕膜化的形态学特征5

1.2.2蜕膜化的作用6

1.2.3蜕膜化的分子变化7

1.2.4蜕膜细胞的多核化7

1.3NOP2/SunRNAmethyltransferase5(NSUN5)8

1.4研究内容及研究意义9

1.4.1研究内容9

1.4.2研究意义10

第二章重度先兆子痫患者与正常妊娠孕妇的临床数据11

2.1引言11

2.2实验材料11

2.2.1研究对象与分组11

2.2.2标本采集11

2.3实验结果11

2.3.1研究人群的临床基线特征11

2.3.2NSUN5及NSUN5SNP与PE显著相关12

2.4讨论14

2.5本章小结14

第三章Nsun5敲除对小鼠的影响15

3.1引言15

3.2实验材料与方法15

3.2.1实验材料15

3.2.2CRISPR/Cas9基因编辑15

3.2.3苏木素和伊红（H＆E）染色分析16

3.2.4PAS染色分析17

3.2.5天狼猩红染色分析18

3.2.6透射电镜分析18

3.2.7免疫组织化学分析20

3.2.8RNA提取及qPCR分析20

3.2.9组织蛋白提取以及WesternBlot检测21

3.3实验结果24

3.3.1Nsun5基因敲除导致小鼠存活率显著降低24

3.3.2Nsun5-/-小鼠表现出多器官受损26

3.3.3Nsun5-/-小鼠肾脏致命损伤29

3.3.4Nsun5缺失诱导DNA损伤和细胞凋亡的积累31

3.4讨论33

3.5本章小结35

第四章NSUN5R295C点突变对小鼠妊娠的影响36

4.1引言36

4.2实验材料与方法37

4.2.1实验材料37

4.2.2构建NSUN5R295C点突变小鼠38

4.2.3基因型鉴定38

4.2.4小鼠血压的测量与统计40

4.2.5蛋白尿检测40

4.2.6不同时期小鼠胚胎的获取与拍照42

4.2.7苏木素和伊红(H＆E)染色分析42

4.2.8PAS染色分析42

4.2.9透射电镜分析42

4.2.10免疫荧光染色分析42

4.2.11小鼠人工诱导蜕膜化42

4.2.12胎盘面积统计及数据统计分析43

4.2.13mRNA转录组测序分析44

4.2.14免疫组织化学分析45

4.2.15RNA提取及qPCR分析45