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目录
摘要I
AbstractIII
1绪论1
1.1流感病毒概述1
1.1.1流感病毒分类1
1.1.2禽流感病毒的传播2
1.1.3禽流感病毒的进化3
1.1.4H5亚型高致病性禽流感病毒国内外流行情况及危害5
1.2影响流感病毒抗原性的因素6
1.2.1抗原漂移对抗原性的影响6
1.2.2抗原转变对抗原性的影响9
1.2.3蛋白糖基化对抗原性的影响9
1.3流感病毒的受体结合特性11
1.3.1唾液酸受体11
1.3.2流感病毒的受体结合特性研究12
1.4随机突变文库的应用13
1.5研究目的及意义14
22020-2023年H5亚型禽流感分离株抗原性差异分析15
2.1实验材料15
2.1.1实验毒株15
2.1.2实验血清15
2.2实验方法16
2.2.1序列同源性分析16
2.2.2抗原图谱16
2.2.3抗原分析方法16
2.2.4糖基化位点预测17
2.2.5抗原表位氨基酸分析17
2.2.6氨基酸构象预测及稳定性评估17
2.2.7分子对接18
2.3结果19
2.3.1H5亚型禽流感病毒分离株的抗原性分析19
2.3.2H5亚型禽流感病毒分离株HA基因的抗原表位区域氨基酸分析22
2.3.3计算机预测评估分离株HA蛋白抗原表位氨基酸构象变化24
2.3.4H5分离株HA蛋白糖基化位点对抗原性的影响26
2.3.5H5分离株HA蛋白188位和226位氨基酸突变对唾液酸受体的亲和力影响
27
2.4讨论31
2.5小结33
3HA蛋白可塑性对H5亚型禽流感疫苗抗原性的影响34
3.1实验材料34
3.1.1质粒、细胞、鸡胚34
3.1.2主要试剂34
3.1.3仪器设备35
3.1.4溶液配制35
3.2实验方法36
3.2.1基因合成36
3.2.2质粒构建36
3.2.3随机突变病毒文库的拯救40
3.2.4随机突变病毒文库的鉴定41
3.2.5随机突变病毒文库的分离44
3.3结果47
3.3.1HA抗原表位氨基酸随机突变文库的构建、拯救、鉴定及分离47
3.3.2HA抗原表位氨基酸位点随机突变文库（NNK）的构建、拯救、鉴定及分离
57
3.3.3HA受体结合区域随机突变文库的构建、拯救、鉴定及分离60
3.4讨论63
3.5小结64
4全文结论64
参考文献65
致谢77
缩略语表
英文缩写英文名称中文全称
AIVAvianinfluenzavirus
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