鲤鱼FTR55调控抗病毒天然免疫机制的研究.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章综述1

1.1抗病毒天然免疫及信号通路的调控1

1.2TRIM的研究概述2

1.2.1TRIM的发现2

1.2.2TRIM的结构及分类2

1.2.3TRIM的功能4

1.3TRIM对先天免疫信号通路的调控5

1.3.1TRIM对先天免疫RLR信号通路的调控5

1.3.2TRIM对先天免疫TLR信号通路的调控6

1.3.3TRIM对先天免疫cGAS-STING信号通路的调控6

1.4鱼类TRIM对天然免疫不同信号分子的调控7

1.4.1与哺乳动物同源的TRIM对天然免疫信号分子的调控7

1.4.2鱼类特有的TRIM对天然免疫信号分子的调控7

1.5本文的研究目的与意义8

第二章CcFTR55的鉴定和组织表达模式分析10

2.1前言10

2.2实验材料、试剂、仪器11

2.2.1实验动物和实验细胞11

2.2.2实验所用试剂11

2.2.3实验所用仪器11

2.3实验方法12

2.3.1鲤鱼的各组织取材12

2.3.2组织RNA的提取12

2.3.3cDNA的获取13

2.3.4分离外周血白细胞（peripheralbloodleucocytes，PBLs）13

2.3.5CcFTR55的引物设计14

2.3.6PCR扩增目的基因CcFTR5514

2.3.7琼脂糖凝胶电泳及PCR产物回收15

2.3.8PCR回收产物的平末端连接16

2.3.9转化16

2.3.10将阳性克隆进行筛选和鉴定16

2.3.11CcFTR55的生物信息学分析17

2.3.12实时荧光定量PCR19

2.4实验结果20

2.4.1CcFTR55基因的克隆及生物信息学分析20

2.4.2经SVCV刺激后，鲤鱼各组织中CcFTR55的表达情况23

2.4.3在鲤鱼外周血白细胞中CcFTR55表达量的变化25

2.4.4CcFTR55对病毒复制的影响26

2.5讨论27

2.6小结29

第三章CcFTR55正调控干扰素表达的作用机制30

3.1前言30

3.2实验材料、试剂及仪器31

3.2.1实验细胞31

3.2.2实验试剂31

3.2.3实验所用仪器32

3.2.4细胞培养32

3.3实验方法34

3.3.1CcFTR55表达载体的构建34

3.3.2实时荧光定量PCR37

3.3.3免疫印迹实验（WesternBlot）38

3.3.4双荧光素酶报告基因实验40

3.3.5免疫荧光实验40

3.3.6免疫共沉淀实验41

3.3.7细胞病变效应42

3.3.8病毒蚀斑实验43

3.4实验结果43

3.4.1CcFTR55对poly(I:C)诱导的IFN-1及ISGs的影响43