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目录
摘要I
AbstractIII
第一章绪论1
1.1核酸修饰酶1
1.2RNA甲基转移酶-METTL3/141
1.2.1METTL3/14功能简述1
1.2.2METTL3/14检测意义2
1.2.3METTL3/14检测方法的研究进展3
1.3端粒酶6
1.3.1端粒酶功能简述6
1.3.2端粒酶检测意义7
1.3.3端粒酶检测方法的研究进展8
1.4构建荧光生物传感器用于检测核酸修饰酶11
1.5本论文研究内容15
6
第二章构建荧光编码的纳米结构用于灵敏检测临床组织中mA修饰酶-METTL3/14的
活性16
2.1引言16
2.2实验部分17
2.2.1材料和试剂17
2.2.2捕获探针与羧基修饰的磁珠共轭18
2.2.3METTL3/14复合物的检测19
2.2.4凝胶电泳分析19
2.2.5荧光光谱测量19
2.2.6动力学分析20
2.2.7抑制剂筛选20
2.2.8实际样品分析20
2.2.9酶联免疫吸附实验21
2.3结果与讨论21
2.3.1METTL3/14复合物检测的工作原理21
2.3.2MazF酶反应原理23
2.3.3酰胺信号放大原理23
2.3.4可行性分析23
2.3.5实验条件的优化25
2.3.6灵敏度检测27
2.3.7特异性分析28
2.3.8动力学测量29
2.3.9抑制剂分析30
2.3.10细胞中METTL3/14复合物活性的测量30
2.3.11乳腺组织中METTL3/14复合物活性的测量32
2.4本章小结34
第三章构建酶控的DNA纳米机器用于活细胞中端粒酶的一步成像35
3.1引言35
3.2实验部分36
3.2.1试剂及仪器36
3.2.2基底探针和报告探针的制备37
3.2.3DNA纳米机器的构建37
3.2.4细胞培养及端粒酶提取物的制备38
3.2.5体外端粒酶活性测定38
3.2.6凝胶电泳分析38
3.2.7荧光光谱测量39
3.2.8紫外可见光谱测量39
3.2.9抑制剂筛选39
3.2.10活细胞中端粒酶成像39
3.3结果与讨论40
3.3.1端粒酶检测原理40
3.3.2DNA纳米机器的详细行走步骤41
3.3.3用于端粒酶体外检测的DNA纳米机器的表征42
3.3.4定量荧光测量43
3.3.
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