免标记检测长链非编码RNA生物传感器的构建.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章绪论1

1.1非编码RNA概述1

1.1.1非编码RNA1

1.1.2长链非编码RNA1

1.2长链非编码RNA检测意义4

1.3非编码RNA检测方法4

1.3.1比色法4

1.3.2电化学法5

1.3.3荧光法8

1.3.4质谱法12

1.3.5单分子检测12

1.4本论文的研究内容14

第二章基于Corn的高信噪比荧光生物传感器用于免标记检测lncRNA16

2.1引言16

2.2实验部分17

2.2.1试剂和仪器17

2.2.2制备磁珠-捕获探针偶联物19

2.2.3利用基于Corn的生物传感器检测lncRNA19

2.2.4凝胶电泳19

2.2.5荧光测量20

2.2.6qRT-PCR分析20

2.2.7细胞培养和总RNA的提取20

2.3结果与讨论20

2.3.1LncRNA的检测原理20

2.3.2实验方法可行性验证23

2.3.3优化实验条件24

2.3.4比较DFHO和SYBRGold的性能25

2.3.5灵敏度和选择性分析26

2.3.6细胞中lncRNA的检测29

2.3.7回收率测定32

2.4小结33

第三章基于HCR的化学发光生物传感器用于乳腺癌组织中lncRNA的免标记检测35

3.1引言35

3.2实验部分36

3.2.1试剂和仪器36

3.2.2制备发夹底物38

3.2.3制备D-G4序列功能化的金纳米颗粒38

3.2.4制备磁珠-捕获探针偶联物38

3.2.5LncRNA的定量检测39

3.2.6凝胶电泳39

3.2.7化学发光检测39

3.2.8qRT-PCR分析39

3.2.9细胞培养和总RNA的提取39

3.3结果与讨论40

3.3.1LncRNA的检测原理40

3.3.2实验方法可行性验证41

3.3.3D-G4序列功能化的金纳米颗粒分析42

3.3.4优化实验条件43

3.3.5灵敏度和选择性分析45

3.3.6细胞中lncRNA的检测46

3.3.7临床组织中lncRNA的检测47

3.4小结48

第四章总结与展望50

参考文献52

攻读学位期间发表的学术论著67

致谢68

摘要

长度超过200nt的长链非编码RNA（longnoncodingRNA，lncRNA）在转录后调控、

细胞分化和基因表达的表观遗传控制等各种细胞和生理过程中发挥着至关重要的调节和

控制作用。LncRNA的异常表达可导致乳腺癌、肝癌、宫颈癌和前列腺癌等多种癌症的发

生。传统的lncRNA检测