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植物干花和干叶中金丝桃苷含量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了植物干花和干叶中金丝桃苷含量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于金丝桃科、蔷薇科、桔梗科、杜鹃花科、锦葵科等植物干花和干叶中金丝桃苷含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样中金丝桃苷用乙腈水溶液超声提取，提取液浓缩定容后，用液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。

4试剂和材料

除非另有规定，以下试剂均为分析纯。水应符合GB/T6682规定的一级水要求。

4.1甲醇：色谱纯。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3氯化钠：色谱纯。

4.4标准品：金丝桃苷含量≥98%。

4.5乙腈-水溶液（80:20,v/v)：分别取800mL乙腈和200mL水，混合均匀，备用。

4.6标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取金丝桃苷标准品10.0mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。置于棕色干燥器中，于-18℃下避光储存，有效期3个月。

4.7标准中间液（10.0mg/L）：准确吸取上述标准储备液1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于棕色干燥器中，于-18℃下避光储存，有效期1个月。

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联质谱（配电喷雾离子源）。

5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。

5.3超声波仪。

5.4离心机：转速不低于5000r/min。

5.5氮气吹干装置。

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6试样制备与保存

取适量代表性试样，将植物烘干或晒干，制成干叶或干花，碾成粉末后过40目筛。用洁净密封袋或试样瓶密封后于-18。C保存。

7测定步骤

7.1提取、净化

分别准确称取植物干叶或干花粉末两份平行试料各1.00g（精确值±20mg），加入10mL乙腈水溶液（80:20,v/v)于50mL离心管中，加入氯化钠2～3g,超声提取30分钟，5000r/min离心5min，上清液转入另一个50mL离心管中，残渣再加入10mL乙腈水溶液（80:20,v/v)，重复提取一次，合并上清液，提取液于60℃下氮气吹至近干，用10%甲醇水溶液（10:90,v/v)定容至1.0mL，经0.22μm孔径滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱仪测定；

7.2标准曲线绘制

溶剂标准溶液：准确量取金丝桃苷标准中间液适量，用50%甲醇水溶液稀释配制成金丝桃苷浓度为60、

100、150、200、400、500μg/L的系列标准溶液，现配现用，供液相色谱-串联质谱测定。

基质匹配标准溶液：取各自空白组织试样，按上述方法处理制得其空白基质溶液，准确量取金丝桃苷

标准中间液适量，分别用空白基质溶液稀释，配制成金丝桃苷浓度为60、100、150、200、400、500μg/L

的系列标准溶液，现配现用，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3测定

7.3.1液相色谱条件

色谱柱：C18(1.8μm，2.1×100mm)

流动相：A：纯水，B：甲醇，梯度洗脱，洗脱条件见表1

流速：0.25mL/min

进样量：5μL

表1液相色谱梯度洗脱条件

时间,min

A:%

B：%

0

90

10

0.5

90

10

5

10

90

5.8

10

90

6

90

10

8

90

10

7.3.2质谱条件

电离模式：电喷雾电离正离子模式(ESI-)；

离子源：电喷雾离子源

扫描方式：负离子扫描

检测方式：多反应离子检测(MRM)；

脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；

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喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；

监测离子参数情况见表2。

表2MRM监测模式下金丝桃苷质谱优化条件

化合物

母离子(m/z)

子离子(m/z)

碰撞诱导解离电压E/V

碰撞能量U/V

金丝桃苷

463

299.9*

130

22

270.8

120

36

254.9

120

36

*为定量离子

7.3.3定性测定

通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差不大于5%；试样特征离子的相对丰度与

浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断试样中存在金丝桃苷成分。

表3定性测定时相对离子丰度的最大允许