鲤鱼BCL-2家族分子的鉴定及其对NLRP1炎症小体的调控机制研究.pdf

目录

中文摘要I

AbstractIII

第一章综述1

1.1天然免疫模式识别受体概述1

1.2炎症小体研究现状4

1.3哺乳动物NLRP1炎症小体的调控机制研究8

1.4鱼类NLRP1炎症小体研究概述9

1.5BCL-2蛋白家族分类及其功能研究10

1.6BCL-2蛋白对炎症小体激活的调控研究11

1.7本论文的研究目的及意义12

第二章CcBCL-2a/b和CcBCL-xL基因克隆鉴定与组织表达研究13

前言13

2.1实验材料与仪器14

2.1.1实验材料与试剂14

2.1.2试剂配制15

2.1.3仪器设备16

2.2实验方法17

2.2.1鲤鱼饲养17

2.2.2组织取材17

2.2.3基因序列的克隆鉴定18

2.2.4真核表达载体的构建22

2.2.5实时荧光定量PCR23

2.2.6免疫荧光实验25

2.2.7目的基因的生物信息学分析27

2.3实验结果28

2.3.1CcBCL-2a/b和CcBCL-xL序列的克隆和鉴定28

2.3.2CcBCL-2a/b和CcBCL-xL的亚细胞定位32

2.3.3CcBCL-2a/b和CcBCL-xL在健康鲤鱼组织中的表达模式33

2.3.4CcBCL-2a/b和CcBCL-xL基因在不同免疫刺激下的表达变化34

2.4讨论42

第三章CcBCL-2a/b和CcBCL-xL对CcNLRP1炎症小体激活的抑制作用44

前言44

3.1实验材料与仪器45

3.1.1实验材料与试剂45

3.1.2试剂配制45

3.1.3仪器设备46

3.2实验方法46

3.2.1真核表达载体构建46

3.2.2免疫共沉淀47

3.2.3免疫荧光共聚焦实验49

3.2.4ASC寡聚实验49

3.2.5ASC斑点形成实验50

3.2.6Caspase-1酶活性检测实验50

3.2.7细胞毒性实验50

3.3实验结果51

3.3.1CcBCL-2a/b和CcBCL-xL与CcNLRP1的相互作用51

3.3.2CcBCL-2a/b和CcBCL-xL与CcNLRP1的共定位53

3.3.3CcBCL-2a/b和CcBCL-xL抑制CcASC的寡聚54

3.3.4CcBCL-2a/b和CcBCL-xL抑制CcCaspase-1酶活性56

3.3.5CcBCL-2a/b和CcBCL-xL抑制细胞毒性57

3.4讨论59

第四章CcBCL-2a/b和CcBCL-xL与CcNLRP1相互作用的结构域探究61

前言61

4.1实验材料与仪器62

4.2实验方法62

4.2.1结构域缺失突变体的构建62

4.2.2结构域表达载体的构建64

4.2.3免疫共沉淀与WesternBlot64

4.3实验结果64

4.3.1CcBCL-2a/b和CcBCL-xL与CcNLRP1-LRR结构域的相互作用64

4.3.2CcBCL-2a/b和CcBCL