生物催化与生物转化.ppt

虾青素的提取分析检测（胞内产物）蒸馏水或柠檬酸自溶法机械破碎后溶剂提取法进行灭活处理，灭活酵母，调整pH后加入芽孢杆菌有机溶剂提取法：甲醇、乙酸、二甲亚砜、丙酮和石油醚避免光、热、氧等的破坏作用TLC法分析：25%的丙酮和75%的正己烷HPLC法：50%正己烷和50%醋酸乙酯第128页,共129页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第129页,共129页，星期六，2024年，5月例：将合成与四环素类似结构的聚酮体基因蔟克隆至含有D-橄榄酸基因产生菌S.fradiae，可产生糖苷化的四环素。将megosamine合成基因簇克隆至红霉素产生菌，可以产生巨霉素第96页,共129页，星期六，2024年，5月第97页,共129页，星期六，2024年，5月酮酯类化合物对大环内酯耐药菌比较有效，C12位羟基化是酮内酯进一步被肼基取代的必要过程（8）体外表达系统DEBS1+TE、DEBS1+单元3+TE或DEBS3+TE系统均能在体外合成相应产物，而且可以接受两种构型的底物形成两种构型的化合物。第98页,共129页，星期六，2024年，5月组合生物合成的表达系统载体系统第99页,共129页，星期六，2024年，5月第100页,共129页，星期六，2024年，5月第101页,共129页，星期六，2024年，5月第102页,共129页，星期六，2024年，5月第103页,共129页，星期六，2024年，5月其他较新的聚酮类化合物基因簇及进行基因组合生物合成的可能性1埃波霉素基因簇含有9个单元PKS、22个开放阅读密码框和1个非核糖体肽合成酶组成用基因突变或缺失可进行埃波霉素的改造，如使2MT域缺失，可以获得4-单甲基依普希隆。第104页,共129页，星期六，2024年，5月2拉伐他汀基因簇由两个PKSI型酶、拉伐他汀的九酮体合成酶和二酮体合成酶组成。第105页,共129页，星期六，2024年，5月3海洋微生物中的PKS基因海洋微生物中分离到产生肠菌素和wailupemycin两种三维结构的聚酮体化合物。第106页,共129页，星期六，2024年，5月非核糖体多肽合成酶类型基因组合生物合成许多具生物活性、分子量较小的多肽的合成是由非核糖体多酶体系介导。NRPS是由四种以上多功能酶组成，包括活化、起始、延伸、终止。NPRS首先将氨基酸活化为腺嘌呤核苷酸，然后将氨基酸缩合至酶的SH基团，再逐步聚合成多肽。最后由硫酯酶环化和从酶系中将肽链释放。第107页,共129页，星期六，2024年，5月微囊藻素生物合成基因簇由10个ORF组成，6个多功能酶负责前体的掺入，生物合成过程有非通常功能的酶的参与，因而形成一些特殊的结构。第108页,共129页，星期六，2024年，5月组合生物合成存在的问题多酶体中经组合的前一酶系所产生的中间体有时不能被下一酶系所接受，影响了终产物的形成。宿主的限制修饰系统产物的后修饰需要综合考虑基因组合改变原来酶系对底物的特异性和对新产物后修饰酶的可塑性生物学与化学的有机组合链霉菌的基因转化系统尚未成熟发展体外蛋白系统广泛的开发基因资源第109页,共129页，星期六，2024年，5月第七章胡萝卜素的生物合成胡萝卜素生物合成的基因工程胡萝卜类色素广泛分布于藻类、植物和一些细菌包括蓝细菌，已知结构的胡萝卜素已经超过600多个，其主要用途是作为维生素A的营养源、动物饲料色素、化妆品等，同时也发现具有抑癌活力和防止慢性疾病功能。第110页,共129页，星期六，2024年，5月生物合成途径的基因和酶迄今为止，已经有150个以上的基因，编码24个不同crt酶已从细菌、植物、藻类和真菌分离。第111页,共129页，星期六，2024年，5月利用已经克隆出来的合成基因可以在重组微生物中构建一系列的胡萝卜素。为了扩大结构不同的胡萝卜素，将不同的合成基因进行组合后在E.coli中进行表达将合成胡萝卜素前体的另一个途径的基因，包括参与IDP合成的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶和idi在E.coli中过量表达，B-胡萝卜素和玉米黄质可达到1.5mg/g干重。第112页,共129页，星期六，2024年，5月微藻酮基胡萝卜素的产生（1）Phaffiarhodozyma(2)董氏藻（3）红球藻在生长阶段胡萝卜素合成极少，在环境条件影响下，鞭毛细胞变为静孢子时才大量合成虾青素，另外混养条件、缺氮和磷，以及加入氯化钠、乙酸、硫酸亚铁、天门冬县酰胺等可以促进色素的生产。B-胡萝卜素(1)B-胡萝卜素在医学上用于维生素A缺乏症和光敏感患者的治疗。（2）天然B-胡萝卜素是混合型的立体异构体